含有反向取向人泛素C启动子的逆转录病毒载体制造技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有反向取向人泛素C启动子的逆转录病毒载体相关申请的交叉引用本申请要求2015年7月1日提交的USSN62/187,678的优先权和权益，所述专利出于所有目的以引用的方式整体并入本文。政府资助的声明本专利技术根据国立卫生研究院的国家心肺及血液研究所(NationalHeartLungandBloodInstituteattheNationalInstitutesofHealth)授予的批准号HL073104在政府支持下进行。政府享有本专利技术中的某些权利。背景基因递送至人细胞已被探索作为校正或保护免受各种人疾病如先天性酶缺陷或恶性血液病的遗传改变的手段。已经开发了各种基因转导系统，包括致癌逆转录病毒载体(oncoretroviralvector)、慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。然而，尽管载体系统多种多样，但细胞转导效率对于治疗功效仍然可能太低。尽管对有效载体有公认需要，但大多数靶细胞中转基因的高水平表达对基因转移技术而言一直是重大挑战。概述在各个实施方案中，提供了包含处于反向取向的人泛素C启动子的逆转录病毒载体，以及含有此类载体的病毒颗粒、用此类载体转导的...
【技术保护点】
一种重组逆转录病毒载体，所述载体包含人泛素C(UBC)启动子和多克隆位点，其中所述UBC启动子在所述载体中处于反向取向，以使得自所述启动子转录的方向朝向所述载体的5'长末端重复序列(LTR)定向并转录插入所述多克隆位点中的核酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.01 US 62/187,6781.一种重组逆转录病毒载体，所述载体包含人泛素C(UBC)启动子和多克隆位点，其中所述UBC启动子在所述载体中处于反向取向，以使得自所述启动子转录的方向朝向所述载体的5'长末端重复序列(LTR)定向并转录插入所述多克隆位点中的核酸。2.一种重组逆转录病毒载体，所述载体包含可操作地连接至转基因的人泛素C(UBC)启动子，其中所述启动子和所述转基因处于反向取向，以使得所述转基因自所述启动子转录的方向朝向所述载体的5'长末端重复序列(LTR)定向。3.根据权利要求1至2中任一项所述的载体，其中所述启动子包含来自所述人泛素C基因UCSC人基因组序列型式hg19减去约125398318位至约125399530位的链的片段或由所述片段组成。4.根据权利要求1至3中任一项所述的载体，其中所述启动子内的内含子在逆转录病毒包装期间不丢失。5.根据权利要求1至4中任一项所述的载体，其中所述载体含有处于反向取向的聚腺苷酸化信号。6.根据权利要求5所述的载体，其中所述聚腺苷酸化信号(polyA)被插入所述启动子的3'，所述3'是所述启动子的相对于整个载体序列的5'。7.根据权利要求5至6中任一项所述的载体，其中所述聚腺苷酸化信号选自由以下各项组成的组：牛生长激素聚腺苷酸化信号序列、人生长激素聚腺苷酸化信号、兔β-球蛋白基因聚腺苷酸化信号、人疱疹病毒(HSV)聚腺苷酸化信号以及胸苷激酶(TK)基因聚腺苷酸化信号。8.根据权利要求5至6中任一项所述的载体，其中所述聚腺苷酸化信号是牛生长激素聚腺苷酸化信号序列或人生长激素聚腺苷酸化信号。9.根据权利要求1至8中任一项所述的载体，其中与具有处于非反向取向的UBC启动子的相同载体相比，所述载体在瞬时转染且稳定转导的细胞系中提供表达的至少约2倍增加。10.根据权利要求1至9中任一项所述的载体，其中与具有处于非反向取向的UBC启动子的相同载体相比，所述载体在转导的原代细胞中提供表达的至少约4倍增加。11.根据权利要求1至10中任一项所述的载体，其中所述逆转录病毒载体选自由以下各项组成的组：HIV-1慢病毒载体、HIV-2慢病毒载体、α逆转录病毒载体、马传染性贫血病毒(EIAV)慢病毒载体、MoMLV载体、X-MLV载体、P-MLV载体、A-MLV载体、GALV载体、HEV-W载体、SIV-1载体、FIV-1载体以及SERV-1-5载体。12.根据权利要求11所述的载体，其中所述逆转录病毒载体是慢病毒载体。13.根据权利要求12所述的载体，其中所述逆转录病毒载体是基于HIV-1的慢病毒载体。14.根据权利要求12至13中任一项所述的载体，其中所述慢病毒载体是非TAT依赖性和自灭活(SIN)慢病毒载体。15.根据权利要求1至14中任一项所述的载体，其中所述载体是双向载体。16.根据权利要求1至15中任一项所述的载体，其还包含在3'LTR中的绝缘子。17.根据权利要求16所述的载体，其中所述绝缘子包含77bp绝缘子元件FB(FII/BEAD-A)，所述绝缘子元件含有鸡β-球蛋白5'DnaseI超敏位点4(5'HS4)的最小CTCF结合位点增强子阻断组分。18.根据权利要求1至17中任一项所述的载体，其中所述载体包含ψ区载体基因组包装信号。19.根据权利要求1至18中任一项所述的载体，其中所述载体包含Rev响应元件(RRE)。20.根据权利要求1至19中任一项所述的载体，其中所述载体包含中央聚嘌呤段。21.根据权利要求1至20中任一项所述的载体，其中所述载体包含翻译后调控元件。22.根据权利要求21所述的载体，其中转录后调控元件是修饰的土拨鼠转录后调控元件(WPRE)。23.根据权利要求1至22中任一项所述的载体，其中所述载体不能通过重组来重构野生型慢病毒。24.根据权利要求2至23中任一项所述的载体，其中所述载体包含可操作地连接至所述UBC启动子的转基因，其中所述转基因表达用于治疗选自由以下各项组成的组的病变的基因产物：SCID、镰状细胞病、脂质体贮积症、囊性纤维化、肌营养不良、苯丙酮尿症、帕金森氏病和血友病。25.根据权利要求2至15中任一项所述的载体，其中所述载体表达一种或多种选自由以下各项组成的组的基因产物：腺苷脱氨酶(ADA)、IL-2受体γ(IL-2Rγ)、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)基因、Janus激酶-3(JAK3)、Artemis基因、抗镰状化人β-球蛋白基因、因子VIII、因子IX、CFTR、全长或缩短的肌营养不良蛋白、ABCD1基因、TH、AADC、和GCH1、天冬氨酰基氨基葡糖苷酶、α-半乳糖苷酶A、棕榈酰基蛋白质硫酯酶、三肽基肽酶、溶酶体跨膜蛋白、半胱氨酸转运蛋白、酸性神经酰胺酶、酸性α-L-岩藻糖苷酶、保护性蛋白/组织蛋白酶A、酸性β-葡糖苷酶、酸性β-半乳糖苷酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、α-L-艾杜糖醛酸酶、半乳糖脑苷酯酶、酸性α-甘露糖苷酶、酸性β-甘露糖苷酶、芳基硫酸酯酶B、芳基硫酸酯酶A、N-乙酰基半乳糖胺-6-硫酸酯、酸性β-半乳糖苷酶、N-乙酰基葡糖胺-1-磷酸转移酶、酸性鞘磷脂酶(aSM)、NPC-1、α-葡糖苷酶、β-氨基己糖苷酶B、乙酰肝素N-硫酸酯酶、α-N-乙酰基氨基葡糖苷酶、乙酰辅酶A：α-氨基葡糖苷、N-乙酰基葡糖胺-6-硫酸酯、α-N-乙酰基氨基半乳糖苷酶、α-N-乙酰基氨基半乳糖苷酶、α-神经氨酸酶、β-葡糖苷酸酶、β-氨基己糖苷酶A、酸性脂肪酶。26.根据权利要求24所述的载体，其中所述转基因表达用于治疗ADA-SCID的腺苷脱氨酶(ADA)。27.根据权利要求24所述的载体，其中所述转基因表达用于治疗X-SCID的IL-2受体γ(IL-2Rγ)基因/cDNA。28.根据权利要求24所述的载体，其中所述转基因表达抗镰状化人β-球蛋白基因。29.根据权利要求28所述的载体，其中所述抗镰状化人β-球蛋白基因包括约2.3kb的重组人β-球蛋白基因，所述重...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·B·科恩，A·R·库珀，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国,US
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