一种检测苯甲醇乙酰转移酶活性的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测苯甲醇乙酰转移酶活性的方法。本方法运用DTNB能够与巯基相互作用形成有色的硫酚阴离子的反应机理，通过检测反应产物中巯基的生成量来测定蛋白样品的苯甲醇乙酰转移酶活性。本方法的优点是：实验操作步骤简单、样品用量较少以及检测结果灵敏准确。应用本方法可以较简易地从不同蛋白样品中筛选高效的苯甲醇乙酰转移酶。

【技术实现步骤摘要】
一种检测苯甲醇乙酰转移酶活性的方法
本专利技术属于生物化学
，具体涉及一种在体外酶反应体系中检测待测蛋白样品中苯甲醇乙酰转移酶活性的方法。
技术介绍
乙酸苯甲酯存在于许多植物的花和果实中，其生物合成途径是以苯甲醇和乙酰辅酶A为底物，在苯甲醇乙酰转移酶的作用下生成乙酸苯甲酯。现有技术中没有较成熟的检测苯甲醇乙酰转移酶活性的方法，研究中一般是结合质谱技术对反应产物进行定性和定量，进而换算得到酶活性相关参数。然而，此方法操作步骤较繁琐，实验周期较长，成本较高，不利于生物合成途径中苯甲醇乙酰转移酶的开发和研究。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术提供一种检测苯甲醇乙酰转移酶活性的新方法。所述方法有利于从生物中寻找高效的苯甲醇乙酰转移酶，并建立酶制备工艺和酶工程体系。本专利技术所采用的技术方案如下：一种检测待测蛋白样品中苯甲醇乙酰转移酶活性的方法，包括：将待测蛋白样品、DTNB(5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸))、乙酰辅酶A、苯甲醇、MgCl2加入水中混匀进行酶活反应，检测反应体系的吸光度，计算出巯基的生成量，进而计算出待测蛋白样品中苯甲醇乙酰转移酶的活性。所述待测蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测苯甲醇乙酰转移酶活性的方法，其特征在于，包括：将待测蛋白样品、DTNB、乙酰辅酶A、苯甲醇、MgCl2加入水中进行酶活反应，检测反应体系的吸光度，计算出巯基的生成量，进而计算出待测蛋白样品中苯甲醇乙酰转移酶的活性。

【技术特征摘要】
1.一种检测苯甲醇乙酰转移酶活性的方法，其特征在于，包括：将待测蛋白样品、DTNB、乙酰辅酶A、苯甲醇、MgCl2加入水中进行酶活反应，检测反应体系的吸光度，计算出巯基的生成量，进而计算出待测蛋白样品中苯甲醇乙酰转移酶的活性。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测蛋白样品、DTNB、乙酰辅酶A、苯甲醇、MgCl2的质量比为(100-5000)：(1480-5950)：(1510-12150)：(400-1630)：(3-15)；优选为(100-5000)：(1486.32-5945.26)：(1517.95-12143.56)：(405.49-1621.96)：(3.57-14.28)；进一步优选为1000：(2970-2980)：(3030-3050)：(800-820)：(7-8)；更进一步优选1000：2972.63：3035.89：810.98：7.14。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述待测蛋白样品为组织粗提取蛋白或纯化蛋白。4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述酶活反应是在20-35℃水浴条件下进行。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：包菲，张启翔，程堂仁，王佳，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11