抗VISTA抗体和片段制造技术

本发明专利技术涉及新颖的抗体和片段，这些抗体和片段与T细胞活化的V结构域Ig抑制剂(VISTA)结合，并涉及检测VISTA的方法。

Anti VISTA antibody and fragment

The invention relates to novel antibodies and fragments, which are combined with T cell activated V domain Ig inhibitor (VISTA) and involve in the detection of VISTA.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗VISTA抗体和片段相关申请的交叉引用本申请要求于2015年6月24日提交的美国临时申请号62/184,108，以及于2015年7月1日提交的美国临时申请号62/187,659的权益。上述申请的全部教示内容通过引用结合在此。ASCII文本文件中的材料通过引用结合在此。本申请将包含在以下ASCII文本文件中的序列表通过引用结合，该序列表在此同时提交：a)文件名：01481142017SEQUENCELISTING.txt；2016年6月22日产生，87KB大小。
技术介绍
癌细胞或免疫细胞在肿瘤微环境中的负性免疫检查点调节物的表达可抑制宿主对肿瘤的免疫应答。为了有效对抗癌症，需要阻断肿瘤介导的宿主免疫应答抑制。因此，需要对肿瘤微环境中阻抑抗肿瘤免疫应答的负性免疫检查点调节剂进行抑制的新的有效治疗剂。
技术实现思路
在一个实施例中，本专利技术提供包含与哺乳动物T细胞活化蛋白质的V结构域Ig抑制剂(VISTA)结合的抗原结合区域的分离的抗体(例如，嵌合抗体)、或其抗原结合片段。该抗体包含抗体VH结构域，该抗体VH结构域包含具有SEQIDNO:31的氨基酸序列的VHCDR1、具有SEQIDNO:32的氨基酸序列的VHCDR2、和具有SEQIDNO:33的氨基酸序列的VHCDR3。该抗体进一步包含抗体VL结构域，该抗体VL结构域包含具有SEQIDNO:34的氨基酸序列的VLCDR1、具有SEQIDNO:35的氨基酸序列的VLCDR2、和具有SEQIDNO:36的氨基酸序列的VLCDR3。此外，该抗体包含非人类抗体重链恒定区和非人类抗体轻链恒定区。在一个实施例中，抗体VH结构域包含SEQIDNO:64。在另一个实施例中，抗体VL结构域包含SEQIDNO:45。在一些实施例中，该抗体包含作为鼠抗体重链恒定区的非人类抗体重链恒定区。在特定的实施例中，该鼠抗体重链恒定区是鼠IgG1重链恒定区。在具体的实施例中，该鼠IgG1重链恒定区包含SEQIDNO:76中的重链恒定区。在另一个实施例中，该鼠抗体重链恒定区是鼠IgG2a重链恒定区。在其他实施例中，该抗体包含作为鼠抗体轻链恒定区的非人类抗体轻链恒定区。在特定的实施例中，该鼠抗体轻链恒定区是鼠IgG1轻链恒定区。在具体的实施例中，该鼠IgG1轻链恒定区包含SEQIDNO:77中的轻链恒定区。在另一个实施例中，该鼠抗体轻链恒定区是鼠IgG2a轻链恒定区。在某些实施例中，该抗体或抗原结合片段与人类VISTA蛋白质结合。在特定的实施例中，该抗体或抗原结合片段与存在于具有以下显示的氨基酸序列的人类VISTA蛋白质中的表位结合：MGVPTALEAGSWRWGSLLFALFLAASLGPVAAFKVATPYSLYVCPEGQNVTLTCRLLGPVDKGHDVTFYKTWYRSSRGEVQTCSERRPIRNLTFQDLHLHHGGHQAANTSHDLAQRHGLESASDHHGNFSITMRNLTLLDSGLYCCLVVEIRHHHSEHRVHGAMELQVQTGKDAPSNCVVYPSSSQESENITAAALATGACIVGILCLPLILLLVYKQRQAASNRRAQELVRMDSNIQGIENPGFEASPPAQGIPEAKVRHPLSYVAQRQPSESGRHLLSEPSTPLSPPGPGDVF(SEQIDNO:46)。在一个实施例中，该抗体或抗原结合片段是完整抗体。在另一个实施例中，本专利技术提供包含抗体重链(包含SEQIDNO:77)和抗体轻链(包含SEQIDNO:68)的分离的抗体、或其抗原结合片段。在还另一个实施例中，本专利技术提供包含本专利技术的抗体或抗原结合片段的组合物。在另外的实施例中，本专利技术提供用于检测样品中哺乳动物VISTA蛋白质的方法。该方法包括在本专利技术的抗体或抗原结合片段与样品中的VISTA蛋白质结合的条件下，使样品与该抗体或抗原结合片段接触，并且检测与样品中的VISTA蛋白质结合的抗体或抗原结合片段。在一个实施例中，该样品包含细胞。这些细胞除了其他之外可以包括免疫细胞(例如，骨髓细胞)、基质细胞(例如，成纤维细胞、内皮细胞)、和/或癌症(例如，恶性的)细胞，如肺癌细胞、前列腺癌细胞、急性髓性白血病(AML)细胞、黑色素瘤细胞、卵巢癌细胞或结肠癌细胞，或其任何组合。在特定的实施例中，该样品包含组织或生物学流体。在一个实施例中，在本方法中使用的该抗体或抗原结合片段包含可检测标记。在某些实施例中，该方法包括免疫组织化学(IHC)染色测定。在另一个实施例中，该方法包括流式细胞术测定。本专利技术提供用于检测生物学材料中的一种或多种VISTA蛋白质的改进的试剂和方法。此类试剂和方法典型地具有增强的敏感性和/或特异性。附图说明图1A-1C：图表，显示了在TF-1AML细胞系中通过流式细胞术在VISTA蛋白质的TF1AML细胞表达方面的VISTA表达。图2A-2E：图表，显示了用于鉴定人类骨髓和淋巴子集的染色和门控策略。图3A-3G：图表，显示了在来自一个健康正常供体的人类骨髓和淋巴子集上的VISTA表达。图4：图表，显示了在多个健康正常供体中的人类骨髓和淋巴子集上的VISTA表达。图5A-5B：图表，显示了用于鉴定在人类单核细胞和巨噬细胞上的VISTA表达的染色和门控策略。图6A-6C：图表，显示了在人类单核细胞和巨噬细胞上的VISTA表达。图7A-7E：图表，显示了用于鉴定人类T细胞和NK细胞子集上的VISTA表达的染色和门控策略。图8A-8G：图表，显示了在来自一个健康正常供体的人类T细胞和NK细胞子集上的VISTA表达。图9：图表，显示了多个健康正常供体中的人类T细胞和NK细胞子集上的VISTA表达。图10A-10D：图表，显示了用于鉴定人类树突细胞子集上的VISTA表达的染色和门控策略。图11A-11C：图表，显示了在来自一个健康正常供体的人类树突细胞子集和嗜碱粒细胞上的VISTA表达。图12：图表，显示了多个健康正常供体的人类树突细胞子集和嗜碱粒细胞上的VISTA表达。图13A-13D：健康人类外周血细胞上的VISTA在表达的分析。使用多色流式细胞术分析的健康人类外周血细胞上VISTA表达的谱图：将来自2个不同个体的全血样品分析VISTA在单核细胞(SSClo,CD11bhiCD14hiCD16-veCD33+veHLA-DR+veCD19-ve)(图13A)、中性粒细胞(SSChiCD177+CD11bhiCD14loCD16+veCD33+veHLA-DR-veCD19-ve)(图13B)上的表达。使用菲柯尔(Ficoll)梯度将外周血单核细胞分离用于分析CD4+T细胞(CD3+veCD4+ve)(图13C)、和CD8+T细胞(CD3+veCD8+ve)(图13D)。图14A-14C；来自肺癌患者和健康对照供体的外周血细胞上的VISTA表达的分析。使用多色流式细胞术分析肺癌患者外周血细胞上VISTA表达的图谱：显示了来自一个个体的代表性的FACS图(图14A)。通过菲柯尔(Ficoll)分离外周血单核细胞并分析VISTA在单核细胞(CD14+CD11b+CD33+HLADR+CD15-)和(图14B)髓源性抑制细胞(CD14-CD11b+CD33-HLADR-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的抗体、或其抗原结合片段，该分离的抗体或抗原结合片段包含抗原结合区域，该抗原结合区域与哺乳动物T细胞活化的V结构域Ig抑制剂(VISTA)蛋白质结合，其中该抗体包含：a)抗体VH结构域，该抗体VH结构域包含具有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VH CDR2、和具有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VH CDR3；b)抗体VL结构域，该抗体VL结构域包含具有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL CDR1、具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL CDR2、和具有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的VL CDR3；c)非人类抗体重链恒定区；以及d)非人类抗体轻链恒定区。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.24 US 62/184,108;2015.07.01 US 62/187,6591.一种分离的抗体、或其抗原结合片段，该分离的抗体或抗原结合片段包含抗原结合区域，该抗原结合区域与哺乳动物T细胞活化的V结构域Ig抑制剂(VISTA)蛋白质结合，其中该抗体包含：a)抗体VH结构域，该抗体VH结构域包含具有SEQIDNO:31的氨基酸序列的VHCDR1、具有SEQIDNO:32的氨基酸序列的VHCDR2、和具有SEQIDNO:33的氨基酸序列的VHCDR3；b)抗体VL结构域，该抗体VL结构域包含具有SEQIDNO:34的氨基酸序列的VLCDR1、具有SEQIDNO:35的氨基酸序列的VLCDR2、和具有SEQIDNO:36的氨基酸序列的VLCDR3；c)非人类抗体重链恒定区；以及d)非人类抗体轻链恒定区。2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体VH结构域包含SEQIDNO:64。3.如权利要求1或2所述的抗体或抗原结合片段，其中该抗体VL结构域包含SEQIDNO:45。4.如权利要求1、2或3所述的抗体或抗原结合片段，其中该非人类抗体重链恒定区是鼠抗体重链恒定区。5.如权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其中该鼠抗体重链恒定区是鼠IgG1重链恒定区。6.如权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中该鼠IgG1重链恒定区包含SEQIDNO:76中的重链恒定区。7.如权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其中该鼠抗体重链恒定区是鼠IgG2a重链恒定区。8.如前述权利要求中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中该非人类抗体轻链恒定区是鼠抗体轻链恒定区。9.如权利要求8所述的抗体或抗原结合片段，其中该鼠抗体轻链恒定区是鼠IgG1轻链恒定区。10.如权利要求9所述的抗体或抗原结合片段，其中该鼠IgG1轻链恒定区包含SEQIDNO:77中的轻链恒定区。11.如权利要求8所述的抗体或抗原结合片段，...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·斯奈德，G·鲍尔，M·A·塞普尔韦达，J·D·阿尔瓦雷斯，
申请(专利权)人：詹森药业有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE