鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法技术

本发明专利技术公开了一种鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法，包括材料取样、组织固定、脱水及透明、浸蜡、包埋、切片、贴片和烤片、脱蜡、复水、染细胞核、染细胞质、脱水、透明和封固等步骤。本发明专利技术较现有石蜡切片制作方法极大地提高了鱼卵巢组织石蜡制备固定的效果，提高了鱼卵巢组织石蜡组织切片的染色效果，改善了脱水和透明的效果，极大地提高了镜下鱼类卵巢组织结构的完整性和清晰度，解决了现有技术在鱼类卵巢组织石蜡切片制作过程中存在的若干问题。为利用形态病理学、免疫学、细胞原位核酸分子杂交、形态计量领域方面应用的研究，为进一步从基因和蛋白水平进行鱼卵巢相关研究提供了支撑条件。

The method of making paraffin section of fish ovarian tissue

The invention discloses a method for producing fish ovarian tissue paraffin sections, including material sampling, tissue fixation, dehydration and transparent, paraffin embedding, slicing, patch, baking, dewaxing, rehydration, staining and dyeing cytoplasm, dehydration, transparent and sealing steps. Compared with the prior paraffin production method can greatly improve the effect of fish ovarian tissue paraffin fixed preparation, improve the dyeing effect of fish ovarian tissue paraffin sections, improved dehydration and transparent effect, greatly improve the microscopic structure of fish ovarian tissue integrity and clarity, to solve the problems the existing technology in paraffin sections of ovarian tissue in the process of making fish. The research provides support for further studies on fish and ovary from gene and protein levels in terms of morphology, pathology, immunology, cell in situ hybridization and morphometry.

【技术实现步骤摘要】
鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法
本专利技术属于生物组织石蜡切片制作
，具体涉及到一种鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法。
技术介绍
石蜡切片由于操作简单、价格低廉的特点，一直是是组织学显微观察中应用最为广泛的一种制作切片的方法。作为传统的生物学研究技术，石蜡切片不但可以进行正常组织细胞形态学方面的观察，而且在病理学、免疫学、细胞原位核酸分子杂交、形态计量领域方面应用也非常广泛。石蜡切片要经过固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片、贴片、脱蜡、染色、透明以及封片等步骤来使其组织细胞保持原有的结构并可以清楚观察和分析。而鱼类卵巢的卵黄比较丰富，导致制作切片很不容易，按照过去的一般方法，切片易碎，切片中间易形成空洞，使显微观察看不清楚结构，其他的免疫和分子生物学分析无法进行。因此，如何对现有石蜡切片制作方法进行改进，解决鱼类卵巢组织切片制作过程中存在的问题，是本领域亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术存在的一些缺陷，提供一种能够改善和提高鱼类卵巢石蜡切片质量的制作方法，该制作方法可以使是鱼类卵巢组织和细胞结构清楚完整，为进一步的免疫学和分子生物学和形态计量方面的分析提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法，步骤如下：（1） 材料取样 鱼卵巢组织取样材料的体积为：3.6‑4 mm×3‑3.3mm×3‑3.3mm；（2）组织固定 鱼卵巢组织经Zamboni’s固定液固定8小时后，流水冲洗6小时，洗去其固定液；（3）脱水及透明 将（2）处理的组织依次用下列试剂处理：50%乙醇10min、70%乙醇15min、80%乙醇15min、95%乙醇90min、95%乙醇90min、无水乙醇2份+正丁醇1份60 min，无水乙醇1份+正丁醇1 份60 min、正丁醇45min、正丁醇45min；（4）浸蜡 将经（3）处理过的组织样放入熔化好石蜡的浸蜡盒中进行浸蜡，依次用下列试剂处...

【技术特征摘要】
1.鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法，步骤如下：（1）材料取样鱼卵巢组织取样材料的体积为：3.6-4mm×3-3.3mm×3-3.3mm；（2）组织固定鱼卵巢组织经Zamboni’s固定液固定8小时后，流水冲洗6小时，洗去其固定液；（3）脱水及透明将（2）处理的组织依次用下列试剂处理：50%乙醇10min、70%乙醇15min、80%乙醇15min、95%乙醇90min、95%乙醇90min、无水乙醇2份+正丁醇1份60min，无水乙醇1份+正丁醇1份60min、正丁醇45min、正丁醇45min；（4）浸蜡将经（3）处理过的组织样放入熔化好石蜡的浸蜡盒中进行浸蜡，依次用下列试剂处理：正丁醇1份+:石蜡1份30min、石蜡90min、石蜡90min（5）石蜡包埋将经（4）处理过的组织样放入熔化好石蜡的包埋盒中进行包埋，等石蜡自然冷却凝固后，把包埋好的蜡块从盒中取出修整；（6）切片将（5）修整好的蜡块粘牢到准备好的小木块上，然后固定于切片机上，与切片刀调成平行，切成蜡带；（7）贴片和烤片在（6）准备的切片中，选择有完整组织样的蜡带，蜡带光滑面向下，放入40~42℃水浴箱中展片后，用多聚赖氨酸处理过的载玻片从水中捞出，使组织样整齐排列在载玻片上，在切片作好标记，放置在切片架上，烘箱45℃烤片5.5-6h，自然冷却；（8）脱蜡将放有载玻片的切片架放入染色缸中，依次用下列试剂处理：二甲苯10min、二甲苯10min；（9）复水将经（8）处理的切片依次用下列试剂处理：无水乙醇2min、无水乙醇2mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈剑杰，曹谨玲，罗永巨，高荣琨，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：山西,14