一种甘青青兰药材中三种化学对照品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种甘青青兰药材中三种化学对照品的制备方法。本发明专利技术采用循环高速逆流色谱经4次循环从甘青青兰药材粗提物中直接分离得到了纯度大于80％的绿原酸、胡麻苷和胡麻苷‑6”‑乙酸酯，其中绿原酸和胡麻苷分离因子小于1.15。本发明专利技术采用制备液相色谱对上述三种化合物进行纯化，得到了纯度大于98％的绿原酸、胡麻苷和胡麻苷‑6”‑乙酸酯化学对照品。本发明专利技术方法简单、高效、重现性好、样品回收率高、易于实现规模化制备，非常适合甘青青兰药材中绿原酸、胡麻苷和胡麻苷‑6”‑乙酸酯化学对照品的制备。

A preparation method of three chemical control products in Radix Gump

【技术实现步骤摘要】
一种甘青青兰药材中三种化学对照品的制备方法
本专利技术涉及一种化学对照品的制备方法，尤其涉及甘青青兰药材中绿原酸、胡麻苷和胡麻苷-6”-乙酸酯化学对照品的制备方法。
技术介绍
甘青青兰为唇形科青兰属植物甘青青兰DracocephalumtanguticumMaxim的干燥全草，分布于甘肃、青海、四川及西藏等地。甘青青兰具有止咳化痰，和胃疏肝，清热利水之功效，用于治疗咳嗽痰多，头晕，胃炎，肝炎，风湿性关节炎，气管炎，溃疡病等。甘青青兰在藏药制剂中应用广泛，200多个藏药制剂中有21种制剂含有甘青青兰。现代药理研究发现甘青青兰提取物具有抗氧化、抗缺氧和抗HBV活性，但药效物质基础尚不明确。研究表明甘青青兰中的黄酮及其苷类和含咖啡酰基的有机酸及其酯类被认为是其生物活性物质。绿原酸、胡麻苷和胡麻苷-6”-乙酸酯为甘青青兰中三种主要生物活性物质。为更好的研究上述三种活性物质的药理活性，需要大量高纯度的化学对照品。长期以来，传统的药材中化学对照品的制备方法多采用硅胶层析，存在样品组分损失、玷污、变性、失活、拖尾，分离困难，收率低等问题。高速逆流色谱(HSCCC)是由美国国立卫生研究院(NIH)的YoichiroIto博士于上世纪80年代专利技术的一种基于液-液分配机理的新型色谱分离纯化技术，无需固体作固定相，不存在固体对样品组分的吸附、玷污、变性、失活、拖尾等现象，样品回收率高，在天然产物有效成分的分离、纯化、制备方面显示出强大的优势，非常适合于化学对照品的制备。本专利技术建立了基于循环高速逆流色谱和制备液相色谱的甘青青兰药材中绿原酸、胡麻苷和胡麻苷-6”-乙酸酯化学对照品的制备方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种简单高效，重现性好，适合规模化制备的甘青青兰药材中绿原酸、胡麻苷和胡麻苷-6”-乙酸酯化学对照品的制备方法。为解决上述问题，本专利技术所述的一种甘青青兰药材中三种化学对照品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品制备：将甘青青兰药材干燥全草粉碎，以1Kg：5L～30L的比例用体积浓度为30～95％的乙醇在提取温度为60～90℃、提取次数1～4次、每次1～4h的条件下进行热回流提取，合并提取液；所述提取液经管式离心后，减压浓缩到无醇味，得到提取物浓缩液；将提取物浓缩液经冷冻干燥，得到粗提物粉末；(2)分离：将上述甘青青兰粗提物粉末直接用循环高速逆流色谱分离，得到3种纯度高于80％的组分；(3)纯化：将上述3种纯度高于80％的组分经制备液相色谱纯化，得到3种纯度高于98％的单体化合物；(4)结构鉴定：将所述单体化合物通过1H-NMR和13C-NMR进行结构鉴定为绿原酸、胡麻苷和胡麻苷-6”-乙酸酯。进一步地，所述样品制备冷冻干燥过程中提取物浓缩液的预冻温度为-20～-50℃，隔板加热温度为-5～20℃。进一步地，所述分离过程中采用的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1～5:3～10:1～5:3～10,v/v)，主机转速为500～1000rpm，分离温度为20～40℃，流动相流速为1.5～3.0mL/min，循环洗脱次数为2～8次。进一步地，所述纯化步骤中采用等度洗脱模式，流动相为30％～60％的甲醇溶液，流速为10～30mL/min。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：1、本专利技术直接从粗提物中分离制备化学对照品，无需复杂的前处理过程，简单高效。2、本专利技术采用循环高速逆流色谱成功分离了分离因子小于1.15的绿原酸和胡麻苷化学对照品。3、本专利技术分离纯化过程样品回收率高、重复性好，易于实现规模化制备，非常适合甘青青兰药材中绿原酸、胡麻苷和胡麻苷-6”-乙酸酯化学对照品的制备。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的说明。图1为本专利技术绿原酸(1)、胡麻苷(2)和胡麻苷6-“-乙酸酯(3)的循环高速逆流色谱分离图。图2为本专利技术绿原酸(1)的制备液相纯化图。图3为本专利技术胡麻苷(2)的制备液相纯化图。图4为本专利技术胡麻苷6-“-乙酸酯(3)的制备液相纯化图。图5为本专利技术绿原酸(1)的纯度检测图。具体实施方式根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。实施例1一种甘青青兰药材中三种化学对照品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品制备：将甘青青兰药材干燥全草粉碎，以1Kg：5L的比例用体积浓度为30％的乙醇在提取温度为60℃下热回流提取，提取1次、提取1h，合并提取液；所述提取液经管式离心后，减压浓缩到无醇味，得到提取物浓缩液；将提取物浓缩液在-20℃条件下预冻，在隔板加热温度为-5℃条件下冷冻干燥，得到粗提物粉末；(2)分离：将上述甘青青兰粗提物粉末直接用循环高速逆流色谱分离，溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1:3:1:3,v/v)，主机转速为500rpm，分离温度为20℃，流动相流速为1.5mL/min，循环洗脱次数为2次，得到3种纯度高于80％的组分；(3)纯化：将上述3种纯度高于80％的组分经制备液相色谱纯化，采用等度洗脱模式，流动相为30％的甲醇溶液，流速为10mL/min，得到3种纯度高于98％的单体化合物；(4)结构鉴定：将所述单体化合物通过1H-NMR和13C-NMR进行结构鉴定为绿原酸、胡麻苷和胡麻苷-6”-乙酸酯。实施例2一种甘青青兰药材中三种化学对照品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品制备：将甘青青兰药材干燥全草粉碎，以1Kg：30L的比例用体积浓度为95％的乙醇在提取温度为90℃下热回流提取，提取4次、每次4h，合并提取液；所述提取液经管式离心后，减压浓缩到无醇味，得到提取物浓缩液；将提取物浓缩液在-50℃条件下预冻，在隔板加热温度为20℃条件下冷冻干燥，得到粗提物粉末；(2)分离：将上述甘青青兰粗提物粉末直接用循环高速逆流色谱分离，溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5:10:5:10,v/v)，主机转速为1000rpm，分离温度为40℃，流动相流速为3.0mL/min，循环洗脱次数为8次，得到3种纯度高于80％的组分；(3)纯化：将上述3种纯度高于80％的组分经制备液相色谱纯化，采用等度洗脱模式，流动相为60％的甲醇溶液，流速为30mL/min，得到3种纯度高于98％的单体化合物；(4)结构鉴定：将所述单体化合物通过1H-NMR和13C-NMR进行结构鉴定为绿原酸、胡麻苷和胡麻苷-6”-乙酸酯。实施例3一种甘青青兰药材中三种化学对照品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品制备：将甘青青兰药材干燥全草粉碎，以1Kg：20L的比例用体积浓度为70％的乙醇在提取温度为70℃的条件下热回流提取、提取3次、每次2h，合并提取液；所述提取液经管式离心后，减压浓缩到无醇味，得到提取物浓缩液；将提取物浓缩液在-30℃条件下预冻，在隔板加热温度为10℃条件下冷冻干燥，得到粗提物粉末；(2)分离：将上述甘青青兰粗提物粉末直接用循环高速逆流色谱分离，溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(2:7:2:7,v/v)，主机转速为800rpm，分离温度为30℃，流动相流速为2.0mL/min，循环洗脱次数为6次，得到3种纯度高于80％的组分；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘青青兰药材中三种化学对照品的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)样品制备：将甘青青兰药材干燥全草粉碎，以1Kg：5L～30L的比例用体积浓度为30～95％的乙醇在提取温度为60～90℃、提取次数1～4次、每次1～4h的条件下进行热回流提取，合并提取液；所述提取液经管式离心后，减压浓缩到无醇味，得到提取物浓缩液；将提取物浓缩液经冷冻干燥，得到粗提物粉末；(2)分离：将上述甘青青兰粗提物粉末直接用循环高速逆流色谱分离，得到3种纯度高于80％的组分；(3)纯化：将上述3种纯度高于80％的组分经制备液相色谱纯化，得到3种纯度高于98％的单体化合物；(4)结构鉴定：将所述单体化合物通过

【技术特征摘要】
1.一种甘青青兰药材中三种化学对照品的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)样品制备：将甘青青兰药材干燥全草粉碎，以1Kg：5L～30L的比例用体积浓度为30～95％的乙醇在提取温度为60～90℃、提取次数1～4次、每次1～4h的条件下进行热回流提取，合并提取液；所述提取液经管式离心后，减压浓缩到无醇味，得到提取物浓缩液；将提取物浓缩液经冷冻干燥，得到粗提物粉末；(2)分离：将上述甘青青兰粗提物粉末直接用循环高速逆流色谱分离，得到3种纯度高于80％的组分；(3)纯化：将上述3种纯度高于80％的组分经制备液相色谱纯化，得到3种纯度高于98％的单体化合物；(4)结构鉴定：将所述单体化合物通过1H-NMR和13C-NMR进行结构鉴定为绿原酸、胡麻苷和胡麻苷-6”...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈涛，李玉林，杨雪，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：青海,63