The invention relates to a specific recognition of tumor cells in the diagnosis and treatment of microRNA integration to the preparation and application of drug delivery system, which can effectively solve the existing technology in the chemotherapy of targeted drug delivery is poor, high toxicity and low imaging resolution of tumor imaging, technical solution, which comprises the following steps: in the preparation of IONP nanoparticles, IONP@SiO nanoparticles, IONP@SiO2 2 CL, IONP@SiO2 N3, loaded with chemotherapy drugs, preparation of hairpin DNA, sealing and connecting the target, namely; the preparation method of the invention is simple, novel and unique, efficient chemotherapy, the prepared drug delivery system can realize controllable switch the magnetic resonance imaging diagnosis in one multifunctional therapeutic drug target, greatly improving the efficiency of antitumor, reduce side effects and realize the high efficiency in diagnosis and treatment of tumor, economic and social benefits The benefit is remarkable.
【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统的制备方法与应用
本专利技术涉及生物医药领域，特别是一种特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统的制备方法与应用。
技术介绍
肿瘤是严重威胁人类健康的一种疾病。目前对肿瘤的主要治疗方法有外科手术、化学治疗和放射治疗。癌症的如何治疗一直以来都是医学界非常重视的问题，化疗是癌症治疗中不可缺少的重要方法之一，但是，一般的化疗药物普遍存在水溶性低，细胞摄取率低，副作用多，靶向性差等。提高癌症治愈率是治疗的关键。提高癌症治愈率的关键因素是早发现，早诊断，早治疗以及肿瘤的特异性靶向治疗。近年来，肿瘤的早期诊断和高效治疗成为研究热点。目前临床上主要使用MRI、CT成像技术诊断肿瘤，且需联合使用，为增加成像性，还需要使用成像剂。造影剂本身不产生信号，通过影响体内局部组织中水质子弛豫时间而改变信号强度，与周围组织形成对比而产生造影作用。MRI常使用的成像剂是钆喷葡胺，碘海醇是CT成像剂的金标准，这两种成像剂成像能力强，患者可耐受。但患者需两次注射成像剂，且这两种成像剂半衰期短，靶向性差，毒副作用明显。因此作...
【技术保护点】
一种特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统的制备方法，其特征是，包括以下步骤：（1）制备IONP纳米粒子：取100‑200mL蒸馏水，加入 4‑6g FeCl3·6H2O和2‑3g FeCl2·4H2O，220‑240rpm转速下搅拌，加热到65‑75℃，保持8‑12min，加入5‑10mL体积浓度28％的氨水溶液，再保持28‑32min，再加入0.5‑1mL油酸，反应2‑6h，水洗至pH值至7.0，再用无水乙醇洗涤2‑3次，真空干燥，得IONP纳米粒子；（2）制备IONP@SiO 2纳米粒子：将步骤（1）制备的IONP纳米粒子分散在氯仿中，IONP的含量...
【技术特征摘要】
1.一种特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统的制备方法，其特征是，包括以下步骤：（1）制备IONP纳米粒子：取100-200mL蒸馏水，加入4-6gFeCl3·6H2O和2-3gFeCl2·4H2O，220-240rpm转速下搅拌，加热到65-75℃，保持8-12min，加入5-10mL体积浓度28％的氨水溶液，再保持28-32min，再加入0.5-1mL油酸，反应2-6h，水洗至pH值至7.0，再用无水乙醇洗涤2-3次，真空干燥，得IONP纳米粒子；（2）制备IONP@SiO2纳米粒子：将步骤（1）制备的IONP纳米粒子分散在氯仿中，IONP的含量为0.05-0.20g/mL，超声28-32min，得IONP氯仿分散液；取0.20-0.30g十六烷基三甲基溴化铵分散在8-12mL水中，完全溶解，加入0.8-1.2mLIONP氯仿分散液，超声分散均匀，200-240rpm转速下搅拌，升温到55-65℃，蒸发25-35min，使氯仿完全蒸发，得到IONP的水分散液；再将IONP水分散液滴加进含有80-90mLH2O和0.5-0.8mL浓度为2M的NaOH中，200-240rpm转速下搅拌，升温到35-45℃，稳定8-12min，加入2.0-4.0mL正硅酸乙酯和10mL乙酸乙酯，600rpm转速下搅拌lmin，再在200-240rpm转速下搅拌6-10h，先水洗3次，再乙醇洗3次，真空干燥，得到IONP@SiO2纳米粒子；（3）制备IONP@SiO2-CL：取步骤（2）制备的IONP@SiO2纳米粒子0.5-1g，加入50-100ml含有0.5-1ml的3-氯丙基三甲氧基硅烷的无水甲苯，在100-120℃下回流10-24h，10000-14000r/min下离心7-10min，分别用无水乙醇和水各洗涤3次，再将得到的纳米粒子分散到100-200ml含有1.0-2.0g的硝酸铵的体积浓度95%的乙醇溶液中，75-85℃下回流6-16h，得到的产物先用乙醇洗涤2-3次，然后再用水洗涤2-3次，去除模板剂，60℃真空干燥过夜8-12h，即得IONP@SiO2-CL；（4）制备IONP@SiO2-N3：取60-100mg步骤（3）制备的IONP@SiO2-CL，分散在10-20ml无水N，N-二甲基甲酰胺中，通氮气保护，85-95℃油浴，干燥3-5h，然后加入50-200mgNaN3，在75-85℃下搅拌3-10h，再用水洗涤3次，60℃真空干燥过夜8-12h，即得IONP@SiO2-N3；（5）装载化疗药物：取步骤（4）制备的IONP@SiO2-N32-5mg，用超纯水超声分散均匀，离心弃上清，加入浓度为2mg/ml包载有化疗药物阿霉素的pH=5.0-7.4PBS水溶液，恒温振荡10-14h；（6）制备发卡状DNA：取浓度为50-200μM的适配体DNA100-200μL，90-100℃放置3-10分钟，使其变成直线单链，然后缓慢冷却至室温，5’，3’两端的6个碱基互补配对，形成发卡状，得发卡状DNA；所述的适配体DNA序列为：5’-Alkyne(炔基)-GCGCGTCAACATCAGTCTGATAAGCTACGCGC-3’；（7）封孔及连接靶头：将步骤（6）制备的发卡状DNA加入到步骤（5）制备的溶液中，然后加入1-3μL浓度0.1M的催化剂CμBr和1-3μL0.1Mtris-(benzyltriazolylmethylamine)，继续恒温振荡反应10-14h，使发卡状DNA反应到颗粒表面，pH7.4的PBS水溶液洗涤3次，即得特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统。2.根据权利要求1所述特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统的制备方法，其特征是，包括以下步骤：（1）制备IONP纳米粒子：取100mL蒸馏水，加入4gFeCl3·6H2O和2gFeCl2·4H2O，220rpm转速下搅拌，加热到65℃，保持12min，加入5mL体积浓度28％的氨水溶液，再保持28min，再加入0.5mL油酸，反应2h，水洗至pH值至7.0，再用无水乙醇洗涤2次，真空干燥，得IONP纳米粒子；（2）制备IONP@SiO2纳米粒子：将步骤（1）制备的IONP纳米粒子分散在氯仿中，IONP的含量为0.05g/mL，超声28min，得IONP氯仿分散液；取0.20g十六烷基三甲基溴化铵分散在8mL水中，完全溶解，加入0.8mLIONP氯仿分散液，超声分散均匀，200rpm转速下搅拌，升温到55℃，蒸发35min，使氯仿完全蒸发，得到IONP的水分散液；再将IONP水分散液滴加进含有80mLH2O和0.5mL浓度为2M的NaOH中，200rpm转速下搅拌，升温到35℃，稳定12min，加入2.0mL正硅酸乙酯和10mL乙酸乙酯，600rpm转速下搅拌lmin，再在200rpm转速下搅拌10h，先水洗3次，再乙醇洗3次，真空干燥，得到IONP@SiO2纳米粒子；（3）制备IONP@SiO2-CL：取步骤（2）制备的IONP@SiO2纳米粒子0.5g，加入50ml含有0.5ml的3-氯丙基三甲氧基硅烷的无水甲苯，在100℃下回流24h，10000r/min下离心10min，用无水乙醇和水各洗涤3次，再将得到的纳米粒子分散到100ml含有1.0g的硝酸铵的体积浓度95%的乙醇溶液中，75℃下回流16h，得到的产物先用乙醇洗涤2次，然后再用水洗涤2次，去除模板剂，60℃真空干燥过夜8h，即得IONP@SiO2-CL；（4）IONP@SiO2-N3的制备取60mg步骤（3）制备的IONP@SiO2-CL，分散在10ml无水N，N-二甲基甲酰胺中，通氮气保护，85℃油浴，干燥5h，然后加入50mgNaN3，在75℃下搅拌10h，再用水洗涤3次，60℃真空干燥过夜8h，即得IONP@SiO2-N3；（5）装载化疗药物：取步骤（4）制备的IONP@SiO2-N32mg，用超纯水超声分散均匀，离心弃上清，加入浓度为2mg/ml包载有化疗药物阿霉素的pH=5.0PBS水溶液，恒温振荡10h；（6）制备发卡状DNA：取浓度为50μM的适配体DNA100μL，90℃放置3分钟，使其变成直线单链，然后缓慢冷却至室温，5’，3’两端的6个碱基互补配对，形成发卡状，得发卡状DNA；（7）封孔及连接靶头将步骤（6）制备的发卡状DNA加入到步骤（5）制备的溶液中，然后加入1μL浓度0.1M的催化剂CμBr和1μL0.1Mtris-(benzyltriazolylmethylamine)，继续恒温振荡反应10h，使发卡状DNA反应到颗粒表面，pH7.4的PBS水溶液洗涤3次，即得特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统。3.根据权利要求1所述特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统的制备方法，其特征是，包括以下步骤：（1）制备IONP纳米粒子：取120mL蒸馏水，加入4.82gFeCl3·6H2O和2.0gFeCl2·4H2O，230rpm转速下搅拌，加热到70℃，保持10min，加入8mL体积浓度28％的氨水溶液，再保持30min，再加入0.75mL油酸，反应6h，水洗至pH值为7.0，再用无水乙醇洗涤2次，真空干燥，得IONP纳米粒子；（2IONP@SiO2纳米粒子的制备将步骤（1）制备的IONP纳米粒子分散在氯仿中，IONP的含量为0.10g/mL，超声30min，得IONP氯仿分散液；取0.25g十六烷基三甲基溴化铵分散在10mL水中，完全溶解，加入1.0mLIONP氯仿分散液，超声分散均匀，220pm转速下搅拌，升温到60℃，蒸发30min，使氯仿完全蒸发，得到IONP的水分散液；再将IONP水分散液滴加进含有86mLH2O和0.75mL浓度为2M的NaOH中，220rpm转速下搅拌，升温到40℃，稳定10min，加入2.5mL正硅酸乙酯和10mL乙酸乙酯，600rpm转速下搅拌lmin，再在220rpm转速下搅拌8h，先水洗3次，再乙醇洗3次，真空干燥，得到IONP@SiO2纳米粒子；（3）制备I...
【专利技术属性】
技术研发人员：张振中，苏小体，史进进，朱春雨，宋巧丽，许丽华，张红岭，韩明旭，张译文，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南,41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。