一种产甘露聚糖酶的工程菌株制造技术

一种产甘露聚糖酶的工程菌株，它涉及一种产酶工程菌株。本发明专利技术提供了一种用于微生物发酵的产甘露聚糖酶的工程菌株。产甘露聚糖酶的工程菌株地衣芽孢杆菌ＨＤＤＭＭ０２属于芽孢杆菌属，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为ＣＣＴＣＣ　Ｎｏ：Ｍ　２０８０８１地衣芽孢杆菌ＨＤＤＭＭ０２为革兰氏阳性菌，菌株个体呈直杆状，长为１．２～３．０μｍ，宽为０．８～１．０μｍ，具圆端；地衣芽孢杆菌ＨＤＤＭＭ０２菌落呈圆形，乳白色，隆起，边缘整齐，无光泽表面有皱褶，不透明，挑起呈粘水状。采用现有地衣芽孢杆菌液体培养基及发酵条件进行发酵，发酵液中地衣芽孢杆菌ＨＤＤＭＭ０２菌数浓度为１×１０↑［７］～１×１０↑［８］ｃｆｕ／ｍＬ时发酵液中甘露聚糖酶的酶活力达３０００００ＩＵ／ｍＬ以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种产酶工程菌株。
技术介绍
甘露聚糖酶是一种半纤维素酶，可以水解甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳 甘露聚糖和半乳葡萄甘露聚糖等植物多糖，并且具有降低人体胆固醇水平、减轻便泌、降低血糖、增加肠内有益菌和减少有害菌的生理功能；所以被广泛的 应用于食品、保健和医药、饲料、造纸、洗涤、石油压裂液破胶和纺织等领域， 具有广泛的应用空间。采用微生物发酵是目前获得甘露聚糖酶最为理想的途 径。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于微生物发酵的产甘露聚糖酶的工程菌株。 产甘露聚糖酶的工程菌株地衣芽孢杆菌HDDMM02(Bacillus licheniformis HDDMM02)属于芽孢杆菌属(Bacillus)，保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏日期为2008年6月2日，保藏号为CCTCC No: M 208081;地衣芽孢杆 菌HDDMM02为革兰氏阳性菌，菌株个体呈直杆状，长为1.2 3.0 mum，宽为 0.8 1.0 mum，常以成对或链状排列，具圆端；地衣芽孢杆菌HDDMM02菌落呈 圆形，乳白色，隆起，边缘整齐，无光泽表面有皱褶，不透明，挑起呈粘水状。 本专利技术地衣芽孢杆菌HDDMM02每一个细胞产一个芽孢，芽孢呈椭圆或 卵圆。本专利技术地衣芽孢杆菌HDDMM02D-木糖发酵为阴性、山梨醇发酵为阳 性、乳糖发酵为阳性、棉子糖发酵为阳性、海藻糖发酵为阳性、葡萄糖发酵为 阳性、甘露醇发酵为阳性、L-阿拉伯糖发酵为阳性、柠檬酸盐利用试验为阳性、 甲基红试验为阴性、V-P试验为阳性、硝酸盐还原试验为阳性、亚硝酸盐还原 试验为阳性、淀粉水解试验为阳性、丙二酸试验为阳性、明胶液化试验为阳性、 生长温度55℃试验为阴性、质量浓度2%的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓 度3%的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度7%的NaCl耐盐性试验为阳性、 质量浓度10%的NaCl耐盐性试验为阳性。采用现有地衣芽孢杆菌液体培养基及发酵条件都可以对本专利技术地衣芽孢杆菌HDDMM02进行发酵。采用"地衣芽孢杆菌TS-01液体培养的研究"中 使用的液体培养基及发酵条件发酵本专利技术地衣芽孢杆菌HDDMM02，发酵液 中地衣芽孢杆菌HDDMM02菌数浓度为lxl07~lxl08cfu/mL时发酵液中甘露 聚糖酶的酶活力达300000IU/mL以上。本专利技术产甘露聚糖酶的工程菌株HDDMM02 (Sacz7/w //c/^"i/^/m:s HDDMM02)为地衣芽孢杆菌(Bacz7/"s //c^em/omn》属于芽孢杆菌属 (&d//w)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2008年6月2日， 保藏号为CCTCCNo: M 208081。 附图说明图1是具体实施方式一地衣芽孢杆菌HDDMM02菌株形态图(100倍放 大图)，图2是具体实施方式一地衣芽孢杆菌HDDMM02及其相近菌株的16S iDNA基因序列所构建的系统发育树。具体实施例方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方 式间的任意组合。具体实施方式一本实施方式产甘露聚糖酶的工程菌株地衣芽孢杆菌 HDDMM02 (5acz7/wW/c/^"z/or;m;sHDDMM02)属于芽孢杆菌属(Ba"7/"s)， 保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2008年6月2日，保藏号为 CCTCCNo: M 208081;地衣芽孢杆菌HDDMM02为革兰氏阳性菌，菌株个 体呈直杆状，长为1.2~3.0pm，宽为0.8 1.0^im，常以成对或链状排列，具圆 端；地衣芽孢杆菌HDDMM02菌落呈圆形，乳白色，隆起，边缘整齐，无光 泽表面有皱褶，不透明，挑起呈粘水状。本实施方式地衣芽孢杆菌HDDMM02每一个细胞产一个芽孢，芽孢呈椭 圆或卵圆。本实施方式地衣芽孢杆菌HDDMM02菌株形态如图l所示。本实施方式地衣芽孢杆菌HDDMM02 D-木糖发酵为阴性、山梨醇发酵为 阳性、乳糖发酵为阳性、棉子糖发酵为阳性、海藻糖发酵为阳性、葡萄糖发酵 为阳性、甘露醇发酵为阳性、L-阿拉伯糖发酵为阳性、柠檬酸盐利用试验为阳 性、甲基红试验为阴性、V-P试验为阳性、硝酸盐还原试验为阳性、亚硝酸盐还原试验为阳性、淀粉水解试验为阳性、丙二酸试验为阳性、明胶液化试验为阳性、生长温度55。C试验为阴性、质量浓度2n/。的NaCl耐盐性试验为阳性、 质量浓度3%的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度7%的NaCl耐盐性试验为 阳性、质量浓度10。/。的NaCl耐盐性试验为阳性。本实施方式地衣芽孢杆菌HDDMM02是采用3，5-二硝基水杨酸比色法 (DNS法)从大麻沤麻液中分离筛选得到的。用弓|物 Al ( 5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') 和 A2 (5'-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3')对本实施方式地衣芽孢杆菌 HDDMM02进行16S rDNA序列扩增。扩增反应体系如下地衣芽孢杆菌 HDDMM02DNA模板10&、浓度为2.5 mmol/L的碱基名称(dNTP) 4^L、 1(^缓冲液(1^径2+ Free) 5^iL、浓度为25 mmol/L的MgCl2 4)iL、浓度为10 pmol/L 的引物5pL、酶活为5 U/pL的Taq酶(DNA聚合酶)0.2^L、并以去离子水补 足至50nL。扩增反应条件为94"预变性5min， 94"C变性30s、 57。C退火30s、 72""C延伸lmin， 35个循环，最后72"延伸7min。本实施方式地衣芽孢杆菌HDDMM02的16S rDNA序列Genbank比对结 果如表1所示(表1中列举了相似性最高的菌种)。 表lNCBI数据库中最相似菌种(登录号) The strains which have the highest identity from NCBI (Accession)相似性 Similarity5ac!7/us v函柳池(AB021198)99%5rev/6a"er/鹏Aa/oto/erara(AJ620368)99%p /m7uy(AM062682)99%份ev沾a"e"'鹏Aa/o/o/enms(AM747812)99%5ac"/Ms /wo_/avensis(AY436360)99%5adZZus fcAe z/o/vm's(AY971527)99%Saa"us/i.c/ie"(/bwn's(DQ167473)99%99%99%5ac!7/us &/iem/o/vwis(EF656455)99%5ac说iis幼6ri/is(EU047884)99%由本实施方式地衣芽孢杆菌HDDMM02及其相近菌株的16S rDNA基因序列所构建的系统发育树如图2所示。本实施方式利用BLASTN程序(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST) — 一对测序结果进行同源性分析，从数据库中得到相关种属16S rDNA序列信息; 再通过DNAMAN (Version 5.1)软件对目的序列和Genbank中近缘菌种的序 列进行缺省参数的对位排列(alignment);然后用该软件中的邻位加入法 (neighbor-joining)进行系统发育分析。以上方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种产甘露聚糖酶的工程菌株，其特征在于产甘露聚糖酶的工程菌株地衣芽孢杆菌ＨＤＤＭＭ０２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ　ＨＤＤＭＭ０２）属于芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ），保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为２００８年６月２日，保藏号为ＣＣＴＣＣ　Ｎｏ：Ｍ２０８０８１；地衣芽孢杆菌ＨＤＤＭＭ０２为革兰氏阳性菌，菌株个体呈直杆状，长为１．２～３．０μｍ，宽为０．８～１．０μｍ，常以成对或链状排列，具圆端；地衣芽孢杆菌ＨＤＤＭＭ０２菌落呈圆形，乳白色，隆起，边缘整齐，无光泽表面有皱褶，不透明，挑起呈粘水状。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡柏岩，凌宏志，葛菁萍，江云飞，王贵宾，接伟光，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]