抗真菌链霉菌制造技术

本发明专利技术涉及微生物领域，特别是涉及一种具有抗稻瘟病（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ　　ｏｒｙｚａｅ）、灰霉病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　　ｓｐ．）作用等的微生物，本发明专利技术特征在于命名为抗真菌链霉菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ａｎｔｉｆｕｎｇｕｓ　　ＹＩＭ　　３５５５１，现保存在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为２００３年２月１４日，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏编号ＣＣＴＣＣＮＯ：Ｍ２０３０１５。本发明专利技术菌株的发酵液具有抗稻瘟病（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａｏｒｙｚａｅ）、灰霉病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　　ｓｐ．）的作用，效果稳定而持久，具有从中开发出新型、高效、无毒天然农药的巨大潜力。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物
，特别是涉及一种具有抗稻瘟病Pyricularia oryzae、灰霉病Botrytis sp.等作用的微生物。
技术介绍
稻瘟病是由Pyricularia oryzae引起的水稻病害；灰霉病是由Botrytis sp.引起的病害，很多农作物都有发生。引起这两类农作物病害的致病菌都是真菌。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种其发酵液具有抗真菌作用的微生物—抗真菌链霉菌。本专利技术所述的抗真菌链霉菌命名为抗真菌链霉菌Streptomycesantifungus YIM 35551，现保藏在国家知识产权局指定的保藏单位，保藏编号为CCTCC NOM203015。本专利技术所述的抗真菌链霉菌.系从我国云南腾冲采集的土壤样品中分离得到。现保藏在国家知识产权局专利局保藏单位保藏，保藏单位名称中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2003年2月14日，保藏编号为M203015。本专利技术所述的链霉菌在大多数培养基上生长良好，气生菌丝呈白色，基内菌丝黄白至黄色。孢子链疏螺旋状。孢子短杆状，孢子表面光滑。明胶液化、淀粉水解、硝酸还原呈阳性，牛奶凝固、胨化呈阴性，不产生硫化氢，不形成黑色素。能利用葡萄糖、甘露糖、木糖、核糖、甘露醇、甘氨酸、组氨酸、甲硫氨酸。细胞壁含有L-二氨基庚二酸和甘氨酸，全细胞水解物含有半乳糖和木糖。培养条件(一)斜面培养条件培养基葡萄糖4g；酵母膏4g；麦芽膏5g；复合维生素3.75mg/L；琼脂15g；蒸馏水水1000ml，pH7.2；培养温度为28℃，培养时间为1周。(二)种子培养条件从斜面挑取部分菌丝体接入种子液中，摇瓶培养36小时。种子培养基糊精120g；大豆粉40g；酵母膏2g；色氨酸0.5g；β-丙氨酸5g；硫酸镁0.5g；磷酸铵0.2g；蒸馏水1000ml，pH7.2，培养温度为28℃。(三)发酵培养条件按10％的接种量接到种子培养基中，摇瓶培养6天。培养基大豆粉10g；葡萄糖10g；蛋白胨3g；氯化钠2.5g；碳酸钙2g；蒸馏水1000ml，pH7.2，培养温度为28℃。即得到发酵液。本发酵液对真菌的抑制作用试验如下(一)、灰霉病盆栽生物测定法(上海农药研究所协助测定)试验用药前一天选择一张真叶期(孢子或菌块接种用)或子叶期(菌块接种用)长势一致盆栽苗。用喷雾法将药剂(本发酵液的乙醇抽提物)喷洒于瓜苗叶片上。喷好药后将试材在喷药廊或温室中晾三小时左右。选择合适的接种时间，接种诱发。菌丝块法接种，在已长好灰霉病菌平皿中，用直径5mm打孔器，在菌落边缘切取菌落圆块，然后贴到药剂处理过的瓜苗叶片中央，置20℃左右恒温室保湿箱中保温保湿4-5天视空白对照发病情况进行调查。孢子接种法，孢子培养参见“黄瓜灰霉病菌培养管理标准”。在已长满孢子的培养基皿中，加入纯净水，用不锈钢平勺轻轻刮取表面孢子，用四层纱布过滤，制成孢子悬浮液，用血球计数板，镜检观察孢子数量，控制孢子浓度在50-60万个/ml之间，然后加入5％的葡萄糖和1％酵母浸汁；然后用细雾手喷枪及WM-4型无油气体压缩机控制压力0.1MP(1kgf/cm2)，在黄瓜苗上均匀喷雾接种孢子悬浮液，每大盘(80-90盆小苗)喷菌液40ml左右，立即小心移至恒温室(20℃)保湿箱中保温保湿诱发，4-5天左右视空白对照发病情况进行分级调查。按有关标准进行数据处理及分析。(二)、水稻稻瘟病盆栽生物测定法(上海农药研究所协助测定)试验用药前一天选择二叶一心或三叶一心、长势一致盆栽稻苗，按序排放，供试验用。参见“药剂喷洒标准”进行喷雾，喷好药(本发酵液的乙醇抽提物)后将试材在喷药廊或温室中晾干(3小时(左右)。或者使用灌根法，按每亩用有效量50g、100g、200g三种剂量，分别根据所用盆栽用盆大小，按量均匀施于有浅水层的各盆稻苗中。接种诱发选择合适的接种时间接种诱发。孢子培养参见“稻瘟病菌培养管理标准”。在已长满孢子的培养基皿中，加入纯净水，用不锈钢平勺轻轻刮取表面孢子，尽量注意不要弄碎表面菌丝层，用双层纱布过滤，制成孢子悬浮液，取0.1ml孢子悬浮液，从血球计数板盖玻片边缘加入计数板中，在显微镜下用计数器计数，控制孢子浓度在20-30万个/ml，备用。用细雾手喷枪及WM-4型无油气体压缩机控制压力0.1MP(1kgf/cm2)，在稻苗上均匀喷雾接种孢子悬浮液每盘(80-90盆小苗)喷菌液40ml左右，立即小心移至恒温室(26-28℃)中下层保湿箱中保湿，保湿(RH100％)诱发，24小时后再将稻苗从中下层移至顶层有灯光照射(2000勒克司光照强度)的保湿箱中，逐渐打开保湿箱通气孔，使箱内湿度维持80-90％，不使稻苗过湿发黄，并每天观察稻苗生长有无异常，五天左右空白对照病斑稳定后即可根据病斑多少进行分级调查。普筛时2级以下方可进入再筛。按有关规定进行数据处理及分析。(三)菌株YIM 35551的筛选结果见图7。本菌株具有抗真菌作用，其发酵液对稻瘟病(Pyricularia oryzae)、灰霉病(Botrytis sp.)等的抗菌作用强，而且药效持久、稳定、无毒，具有从中开发出新型、高效、无毒的天然农药的巨大潜力。本专利技术所述的链霉菌命名为抗真菌链霉菌， 已于2003年2月14日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏单位简称CCTCC，保藏编号为M203015，保藏单位地址武汉，珞珈山，武汉大学内，邮政编码430072。附图说明图1为本专利技术所述的南宁链霉菌在酵母膏-麦芽膏培养基上的电镜照片。图2为本专利技术所述的抗真菌链霉菌的培养特征。图3为本专利技术所述的抗真菌链霉菌的生理生化特征。图4为本专利技术所述的抗真菌链霉菌的碳氮源利用情况。图5为本专利技术所述的抗真菌链霉菌和部分相关菌在GenBank数据库的16S rDNA序列及登录号。图6为菌株YIM35551的筛选结果及部分相关菌株依据16S rDNA序列构建的系统发育树。图7为本专利技术所述的抗真菌链霉菌菌株YIM35551的筛选结果。(一)菌株培养条件1.斜面培养条件培养基葡萄糖4g； 酵母膏4g；麦芽膏5g；复合维生素3.75mg/L；琼脂15g；蒸馏水水1000ml，pH7.2；培养温度为28℃，培养时间为1周。2.种子培养条件从斜面挑取部分菌丝体接入种子液中，摇瓶培养36小时。种子培养基糊精120g；大豆粉40g；酵母膏2g；色氨酸0.5g；β-丙氨酸5g；硫酸镁0.5g；磷酸铵0.2g；蒸馏水1000ml，pH7.2，培养温度为28℃。按以下发酵培养条件培养，即可获得发酵液按10％的接种量接到种子培养基中，摇瓶培养6天。培养基大豆粉10g；葡萄糖10g；蛋白胨3g氯化钠2.5g碳酸钙2g蒸馏水1000ml，pH7.2，培养温度为28℃。本专利技术所述的链霉菌的16S rDNA部分序列分析如下GCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGATGAAGCCTTCGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATATACTGTGCCCCTCATGGGGGACGGTTGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗真菌链霉菌，根据其特征命名为抗真菌链霉菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ａｎｔｉｆｕｎｇｕｓ　　ＹＩＭ　　３５５５１，现保存在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为２００３年２月１４日，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏号ＣＣＴＣＣ　　ＮＯ：Ｍ２０３０１５。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姜怡，李文均，文孟良，李铭刚，徐丽华，姜成林，
申请(专利权)人：云南省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]