一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱制造技术

本实用新型专利技术公开了一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，其包括中空圆柱筒，在所述中空圆柱筒的底部中心延伸设有用于滤液流出的中空管，所述中空管与中空圆柱筒相连通；在中空圆柱筒外套设有保温套，在中空圆柱筒内自下至上依次填充有过滤纱布层和DEAE‑52纤维素层。实验证明，采用本实用新型专利技术提供的层析柱可实现快速纯化回收柔嫩艾美耳球虫子孢子，回收率可高达85％，并能够保持子孢子的活力；另外，本实用新型专利技术所述层析柱还具有结构简单、使用方便、制作成本低等优点，对开展柔嫩艾美耳球虫的研究试验具有重要价值和很强的实用性。

A chromatographic column used to purify the spores of Eimeria tenet

【技术实现步骤摘要】
一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱
本技术是涉及一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，属于分离纯化

技术介绍
鸡球虫病是危害现代规模养禽业最严重的疾病之一，其中致病力最强的当属柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)。由于其对养殖业发展的重要性，吸引了很多学者从事E.tenella分子生物学、细胞培养以及抗药机理等方面的研究，而纯化大量的E.tenella子孢子是上述研究工作的重要基础，并且，子孢子纯化的好坏将直接影响到子孢子纯度以及计数的准确性，从而间接影响后期相关虫体试验结果的可靠性。本申请人实验发现：采用传统的DEAE-52纤维素层析柱(柱高为20cm，填充层为单一DEAE-52纤维素，填充层高为5cm)纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子时，纯化速度慢，子孢子回收率低，认为影响子孢子纯化速度慢、回收率低的主要因素是子孢子的活力和层析速度，而子孢子获得最强运动活力的温度为40℃左右，若控制纯化温度使子孢子在最舒适的层析环境中快速前行，不仅可以大大缩短子孢子的回收时间，而且可明显降低子孢子在游行过程中的损耗，提高子孢子的回收率。但目前还没有一种可实现保温、层析速度快的用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，以致阻碍了对柔嫩艾美耳球虫的研究试验。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本技术的目的是提供一种可提高层析速度和实现保温的用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，以满足快速高收率纯化回收柔嫩艾美耳球虫子孢子的需求。为实现上述目的，本技术采用的技术方案如下：一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，包括中空圆柱筒，在所述中空圆柱筒的底部中心延伸设有用于滤液流出的中空管，所述中空管与中空圆柱筒相连通；其特征在于：在中空圆柱筒外套设有保温套，在中空圆柱筒内自下至上依次填充有过滤纱布层和DEAE-52纤维素层。一种优选方案，所述中空圆柱筒的内径为1～2cm，以尽可能降低子孢子在横向方向的行程损耗。一种优选方案，所述中空圆柱筒采用透明玻璃或塑料材质，以便于观察中空圆柱筒内的充填情况。一种优选方案，所述中空管的底面为斜切面，以加快洗脱液滴速，提高回收速度。一种优选方案，所述保温套套设在中空圆柱筒的外圆周面上，以不影响纯化操作。一种优选方案，所述保温套为设有充水腔的弹性保温套，在所述弹性保温套上设有充水孔和放水孔，在所述充水孔和放水孔上均设有相适配的堵水塞，以方便制作和使用，且可对中空圆柱筒形成缓冲保护，避免被撞击破损。一种进一步优选方案，所述充水孔与充水腔的顶部相连通，所述放水孔与充水腔的底部相连通，以保证整个充水腔能充满水，达到最佳保温效果，以及在使用后可以方便排干充水腔中的水。一种优选方案，所述过滤纱布层由3～5层200目过滤纱布充填而成，以保证纯化效果的前提下降低子孢子的前行阻力。一种优选方案，所述DEAE-52纤维素层的充填高度为2～3cm，以保证纯化效果的前提下降低子孢子的前行阻力。相较于现有技术，本技术具有如下有益技术效果：本技术通过在中空圆柱筒外套设保温套，使纯化回收柔嫩艾美耳球虫子孢子的操作能在恒定温度下进行，使子孢子能获得最强运动活力；同时通过改变填充层结构，以DEAE-52纤维素层为上层，以过滤纱布层为下层，不仅保证了子孢子的纯化效果，而且降低了经DEAE-52纤维素层纯化得到的子孢子的前行阻力，从而实现了快速、高收率纯化回收柔嫩艾美耳球虫子孢子；尤其是，实验结果表明：当DEAE-52纤维素层的充填高度为2～3cm，保温在40±2℃条件下纯化操作，仅需2～3次过柱即可完成回收提纯过程，且回收率可高达85％，并能够保持子孢子的活力；另外，本技术还具有结构简单、使用方便、纯化效率高等优点，对开展柔嫩艾美耳球虫的研究试验具有重要价值和很强的实用性；因此，本技术相对于现有技术，取得了显著性进步。附图说明图1是本技术实施例提供的一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱的结构示意图；图2是实施例提供的一种保温套的截面结构示意图；图3是采用传统DEAE-52纤维素层析柱(柱高为20cm，填充层高为5cm)纯化得到的洗脱液的显微镜图(100×)；图4是采用本技术实施例提供的层析柱纯化得到的洗脱液的显微镜图(40×)。图中标号示意如下：1、中空圆柱筒；11、过滤纱布层；12、DEAE-52纤维素层；2、中空管；21、斜切面；3、保温套；31、充水孔；32、放水孔；33、充水腔；41、充水孔的堵水塞；42、放水孔的堵水塞；5、热水。具体实施方式以下结合附图和实施例对本技术的技术方案做进一步详细描述。实施例请参阅图1所示：本实施例提供的一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，包括中空圆柱筒1，在所述中空圆柱筒1的底部中心延伸设有用于滤液流出的中空管2，所述中空管2与中空圆柱筒1相连通，所述中空管2的底面为斜切面21；在中空圆柱筒1的外圆周面上套设有保温套3，在中空圆柱筒1内自下至上依次填充有过滤纱布层11和DEAE-52纤维素层12。在本实施例中：所述保温套3为设有充水腔33的弹性保温套，在所述弹性保温套上设有充水孔31和放水孔32，所述充水孔31与充水腔33的顶部相连通，所述放水孔32与充水腔33的底部相连通，并且，在所述充水孔31设有相适配的堵水塞41，在所述放水孔32上设有相适配的堵水塞42(请详阅图2所示)。另外，所述中空圆柱筒1的内径为1～2cm，所述过滤纱布层11由3～5层200目过滤纱布充填而成，所述DEAE-52纤维素层的充填高度为2～3cm。所述中空圆柱筒1为透明玻璃或塑料材质。使用本技术所述层析柱进行柔嫩艾美耳球虫子孢子纯化的操作包括如下步骤：1)先将4层洁净的200目过滤纱布充填于洁净的中空圆柱筒1内的底部，并进行压平使形成严实的过滤纱布层11；2)将预先膨化处理好的DEAE-52纤维素悬浮于无菌PBS缓冲液(pH＝8.0)中，然后灌注入中空圆柱筒1内，使其缓慢沉淀，形成层高为2～3cm的DEAE-52纤维素层12；3)将设有充水腔33的弹性保温套套在中空圆柱筒1的外圆周面上，然后将套设有弹性保温套的中空圆柱筒固定在铁架台的固定圈中；4)用堵水塞42塞紧放水孔32，并打开充水孔31上的堵水塞41，通过充水孔31向充水腔33内注入40～45℃的热水5，在充水腔33被注满热水后，用堵水塞41塞紧充水孔31；5)在中空圆柱筒1被预热5～10分钟后，将含有柔嫩艾美耳球虫子孢子的粗提物悬浮在40℃的PBS缓冲液(pH＝7.2)中，并将形成的悬浮液从中空圆柱筒1的顶端沿筒壁加入中空圆柱筒1内，然后将收集容器放置在中空管2的底部21收集洗脱液；6)在纯化洗脱结束后，可从铁架台上取下本技术所述的层析柱，先打开堵水塞42，从放水孔32中排干充水腔33中的水，然后将保温套3从中空圆柱筒1上脱下，再处理中空圆柱筒1内的DEAE-52纤维素层12和过滤纱布层11。图3是采用传统DEAE-52纤维素层析柱(柱高为20cm，填充层高为5cm)纯化得到的洗脱液在放大100倍下的显微镜图；图4是采用本技术实施例提供的层析柱纯化得到的洗脱液在放大40倍下的显微镜图；对比图3和图4可见：采用本技术提供的层析柱纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子，回收率得到本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，包括中空圆柱筒，在所述中空圆柱筒的底部中心延伸设有用于滤液流出的中空管，所述中空管与中空圆柱筒相连通；其特征在于：在中空圆柱筒外套设有保温套，在中空圆柱筒内自下至上依次填充有过滤纱布层和DEAE‑52纤维素层。

【技术特征摘要】
1.一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，包括中空圆柱筒，在所述中空圆柱筒的底部中心延伸设有用于滤液流出的中空管，所述中空管与中空圆柱筒相连通；其特征在于：在中空圆柱筒外套设有保温套，在中空圆柱筒内自下至上依次填充有过滤纱布层和DEAE-52纤维素层。2.根据权利要求1所述的用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，其特征在于：所述中空圆柱筒的内径为1～2cm。3.根据权利要求1或2所述的用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，其特征在于：所述中空圆柱筒采用透明玻璃或塑料材质。4.根据权利要求1所述的用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，其特征在于：所述中空管的底面为斜切面。5.根据权利要求1所述的用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢涛，李金贵，郁星星，朱爱军，
申请(专利权)人：扬州大学，上海市闵行区动物疫病预防控制中心，
类型：新型
国别省市：江苏,32