本发明专利技术公开了通过６－取代－Δ６孕烷的真菌氧化产生１９－去甲－１０β－羧酸的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术是关于结构式I所示的6-取代-Δ6孕烷通过真菌氧化生成结构式II所示的19-去甲-10β羧酸，以及后续的生成结构式III所示的19-去甲-6-取代-Δ6孕烷的化学脱羧步骤。
技术介绍
19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮(19-nor-4，6-pregnadien-6-methyl-17α-ol-3，20-dione)(诺美孕酮，nomegestrol)和结构式III所示的相关分子是合成具有药理活性的19-去甲-甾类化合物(19-nor steroids)时有用的甾类中间体。例如，19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮(诺美孕酮)可以用于合成妇女保健用的的甾类化合物-诺美孕酮乙酸酯(19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮17乙酸酯，19-nor-4，6-pregnadien-6-methyl-17α-ol-3，20-dione 17 acetate)。美国专利4284720公开了，通过发酵培养黑孢菌属(Nigrospora)的真菌，将雄烷或者孕烷系列的10-甲基甾类化合物转化为相应的19羟基甾类化合物。19-去甲甾类化合物已经可以由19-羟基甾类化合物通过化学方法合成。专利技术概述总的来说，本专利技术提供了用于将结构式I所示的6-取代-Δ6孕烷通过真菌氧化生成结构式II所示的19-去甲-10β羧酸，以及后续的化学脱羧步骤生成结构式III所示的19-去甲-6-取代-Δ6孕烷的应用方法。本专利技术提供一种产生结构式II所示19-去甲-10β羧酸的方法， 结构式II其中R1选自H，OH，R-C(O)O-，-CH2OCH3或CH3CH(OR)O-基团；R为C1-C8的烃基基团，R2选自H，F，Cl，Br或CH3-；R3为H或CH2＝；R4为CH2OH或CH3，所述方法通过结构式I所示6-取代-Δ6孕烷的真菌氧化来实现， 结构式I其中R1选自H，OH，R-C(O)O-，-CH2OCH3或CH3CH(OR)O-基团；R为C1-C8的烃基基团，R2选自H，F，Cl，Br或CH3-；R3为H或CH2＝；R4为-CH2OH或-CH3；R5为-CHO，-CH2OH或-CH3，所述方法包括将结构式I所示的6-取代-Δ6孕烷与一种生物转化培养物进行接触，该生物转化培养物中含有一种黑孢菌属菌株，它能够氧化结构式I所示的6-取代-Δ6孕烷中第19位的碳原子。定义如下术语的定义和解释应用于整篇文档，包括专利说明书和权利要求书。所有温度均为摄氏度。r.p.m指每分钟的转数。TLC指薄层层析。HPLC指高压液相层析。psig指每平方英寸的磅数。RO指反渗透。在提及溶液混合物的时候，所用溶剂的配比为体积/体积(v/v)。在提及固体物质在溶剂中的溶解度的时候，固体与溶剂的配比为质量/体积(wt/v)。专利技术详述总的来说，本专利技术涉及结构式I所示的6-取代-Δ6孕烷的真菌氧化 结构式I其中R1选自H，OH，R-C(O)O-，-CH2OCH3或CH3CH(OR)O-基团；R为C1-C8的烃基基团，R2选自H，F，Cl，Br或CH3-；R3为H或CH2＝；R4为-CH2OH或-CH3；R5为-CHO，-CH2OH或-CH3，用于产生结构式II所示的19-去甲-10β-羧酸 结构式II其中R，R1，R2，R3，R4与结构式I中的R，R1，R2，R3，R4相同。任何能够氧化结构式I所示的6-取代-Δ6孕烷中的19位碳原子的黑孢菌属的丝状真菌，均可用于产生结构式II所示的19-去甲-10β-羧酸。实施例1的方法可以用于确定黑孢菌属的具体丝状真菌是否具有对结构式I所示的6-取代-Δ6孕烷中的19位碳原子进行氧化的能力。然后就可以回收结构式II所示的19-去甲-10β-羧酸，并以化学法脱去羧基，产生结构式III所示的19-去甲-6-取代-Δ6孕烷 结构式III其中R，R1，R2，R3，R4与结构式I中的R，R1，R2，R3，R4相同。我们已经发现，将黑孢菌属一些菌株，如球形黑孢(Nigrosporasphaerica)ATCC 12772、Nigrospora gorlenkoanum ATCC 24718和稻黑孢菌(Nigrospora oryzae)ATCC 42775等，与结构式I所示的6-取代-Δ6孕烷进行接触，可产生结构式II所示的19-去甲-10β羧酸。在本专利技术的方法中，生物转化培养基包含表面活性剂和高水平的碳源。表面活性剂选自非离子型去污剂，包括非离子酰胺、非离子酯类如乙氧化烷基酚和聚氧乙烯山梨糖醇酯、乳化石蜡、非离子乙氧化物、三苯乙烯基酚乙氧化物、醇乙氧化物如辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、乙氧化硫醇、封端的乙氧化物、嵌段共聚物和反共聚物等等。优选地，用乙氧化烷基酚、聚氧乙烯山梨糖醇酯或辛基苯氧基聚乙氧基乙醇作表面活性剂。非离子型去污剂采用的浓度可从大约0.1mL/L或0.1g/L到大约4mL/L或4g/L，但通常约1mL/L或1g/L到约2mL/L或2g/L。碳源选自单糖、二糖、三糖、经水解的多糖和糖醇，通常的碳源是葡萄糖。碳源浓度可从大约2g/L到大约100g/L，但通常大约5g/L到大约60g/L。优选用任何本领域已知方法，使真菌在浸没的培养基中、在需氧条件下生长并在原位进行氧化反应。并对于所需的黑孢菌，用本领域技术人员已知的条件、方法、碳源和氮源培养真菌。一般地，在为了真菌19-氧化而进行的制备中，采用一级(primary)和二级(secondary)营养种子方法(vegetativeseed procedure)，或者，也可直接将一级营养种子接种到适于真菌19-氧化的生物转化培养基中。一级营养种子培养物在温度为20度到37度(优选约28度)、pH值为大约3.0到7.5的条件下温育大约24-96小时(优选约48-72小时)。在二级营养种子的培养基中，接种大约0.006％到0.25％(通常为0.012％到0.1％)的一级营养种子培养物，在温度为20度到37度(优选约28度)、二级种子培养基的pH值为大约3.0到7.5(优选为大约5.0-7.0)的条件下温育大约36-72小时(优选约48-60小时)。生物转化培养基可以与二级营养种子培养基相同或者相似，在其中接种大约1％到大约10％(优选为3％到5％)的二级营养种子培养物。在大约12到72小时(优选为大约16-24小时)的初始培养过程之后，将结构式I所示的甾类底物(优选经过微粉化(micronized)之后)加入生物转化反应物中。经过微粉化的结构式I所示甾类底物可以以干粉或者浆液的形式一次性加入、多次加入或者连续加入。微粉化的结构式I所示甾类底物优选浓度高于1g/L，更优选高于2g/L，还更优选高于4g/L。结构式I所示的甾类底物生成结构式II所示的19-氧化产物的生物转化过程可以进行大约1天到9天，通常为大约2天到6天。转化过程可以通过本领域已知的层析法如HPLC来监控，实施例1提供了一种合适的HPLC方法。当结构式I所示的甾类底物生成结构式II所示的19-氧化产物的生物转化结束时，结构式II所示的化合物可应用很多成熟方法中的任何一种加以回收。优选将整个培养液(beer)或经过滤后的培养液用水不溶本文档来自技高网...
【技术保护点】
产生结构式Ⅱ所示的１９－去甲－１０β－羧酸的方法，＊＊＊结构式Ⅱ其中：Ｒ↓［１］选自Ｈ，ＯＨ，Ｒ－Ｃ（Ｏ）Ｏ－，－ＣＨ↓［２］ＯＣＨ↓［３］或ＣＨ↓［３］ＣＨ（ＯＲ）Ｏ－基团；Ｒ为Ｃ↓［１］－Ｃ↓［８］的烃基基团，Ｒ↓［２］选自Ｈ，Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ或ＣＨ↓［３］－；Ｒ↓［３］为Ｈ或ＣＨ↓［２］＝；Ｒ↓［４］为－ＣＨ↓［２］ＯＨ或－ＣＨ↓［３］；所述方法通过结构式Ⅰ所示６－取代－Δ６－孕烷的真菌氧化实现＊＊＊结构式Ⅰ其中：Ｒ↓［１］选自Ｈ，ＯＨ，Ｒ－Ｃ（Ｏ）Ｏ－，－ＣＨ↓［２］ＯＣＨ↓［３］或ＣＨ↓［３］ＣＨ（ＯＲ）Ｏ－基团；Ｒ为Ｃ↓［１］－Ｃ↓［８］的烃基基团，Ｒ↓［２］选自Ｈ，Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ或ＣＨ↓［３］－； Ｒ↓［３］为Ｈ或ＣＨ↓［２］＝；Ｒ↓［４］为－ＣＨ↓［２］ＯＨ或－ＣＨ↓［３］；Ｒ↓［５］为－ＣＨＯ，－ＣＨ↓［２］ＯＨ或－ＣＨ↓［３］，该方法包括，使结构式Ⅰ所示的６－取代－Δ６孕烷与生物转化培养物进行接触，该生物转化培养物中含有能氧化结构式Ⅰ所示６－取代－Δ↑［６］孕烷中第１９位碳原子的黑孢菌属菌株。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔J怀特，伊凡G吉尔伯特，布鲁斯A珀尔曼，
申请(专利权)人：法马西亚和厄普乔恩公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。