利用酵母表达、生产及糖基化改造人干扰素-β的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用酵母表达、生产及糖基化改造人干扰素－β的方法。本发明专利技术应用重组ＤＮＡ技术在甲醇酵母细胞如巴斯德毕赤酵母细胞中生产基因重组人干扰素β并进行糖基化改造的方法，获得既具有真核生物的蛋白翻译后修饰和加工，又不具有抗原性的干扰素β蛋白。本发明专利技术还涉及适合甲醇酵母表达的人干扰素β改构基因的设计；表达载体的构建；基因组中至少稳定地整合有一个拷贝改构干扰素β基因的甲醇酵母工程菌；工程菌的基因表达；糖基化改造等方面。本发明专利技术方法可实现干扰素β高效表达及糖链改造，且分离工艺简便。所产生的干扰素β不具有酵母蛋白的Ｎ－糖基化，若作为蛋白药物不会在人体内产生免疫源性；也不会因为过糖基化使表达蛋白失去活性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用酵母表达、生产及糖基化改造人干扰素－β的方法，由下述步骤组成（１）重组表达载体的构建：克隆出人ＩＦＮβ基因，通过ＰＣＲ方法将ＩＦＮβ基因起始密码子ＡＴＧ前增加ＫＲ＝ＡＡＡＡＧＡ序列，以提高Ｋｅｘ２蛋白酶的酶切 作用，避免毕赤酵母分泌表达外源基因时存在信号肽切割不完全，使重组蛋白Ｎ端带有信号肽氨基酸序列的情况；同时末端Ａｒｇ的碱基ＣＧＡ设计为毕赤酵母喜好密码子ＡＧＡ，以提高ＩＦＮβ在毕赤酵母中的表达；完成分子水平基因改造后将基因构建到酵母表达载 体中，得重组表达载体；（２）重组酵母菌株的构建：用ＳａｌＩ将重组载体ｐＰＩＣ９ｋＩＦＮβ线性...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈敏，王庆杰，王鹏，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]