一株耐氯菌株S616的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种耐氯微生物的应用。一株耐氯菌株Ｓ６１６的应用，其特征在于所述菌株的应用为坚强芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｆｉｒｍｕｓ）Ｓ６１６　　ＣＣＴＣＣ　　ＮＯ．Ｍ２０５１４６应用于含高浓度氯离子废水的处理中。处理方法为：挑取坚强芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｆｉｒｍｕｓ）Ｓ６１６单菌落，于扩大培养基中培养２０－２４ｈ，按培养后的坚强芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｆｉｒｍｕｓ）Ｓ６１６：含高浓度氯离子废水的体积比为（１－４）：５０取坚强芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｆｉｒｍｕｓ）Ｓ６１６接种于含高浓度氯离子废水中，３０－４０℃恒温培养，ｐＨ值为７．０－８．０，反应４８－７２小时。本发明专利技术应用于含高浓度氯离子废水的处理中可高效降解高浓度有机污染物，能在７２小时之内去除废水中的ＣＯＤ６０－７０％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种耐氯微生物的应用。
技术介绍
高盐度难降解有机废水，如石油开采、化工、制药等废水已经成为环保水处理领域的世界性技术难题。而盐酸法黄姜皂素生产废水在高浓度含盐难降解有机物废水中具代表性。一方面，这类废水成分复杂，难降解的有机物多，废水的可生化性差；另一方面，废水中的盐含量高，氯离子浓度大，其混合废水中氯离子浓度可达20000mg/L。目前，含盐有机废水采用非生物方法和生物方法，非生物方法由于其处理费用高、处理效果不好，企业无法接受，生化法一直是水处理工艺中的首先方法，主要采用A-B两段接触氧化法，传统活性污泥法，SBR法，生物滤池，厌氧滤池等，但是上述生物法大多只能处理含盐量为3％以下的废水，而对高盐废水(含盐量5％，甚至20％)难以处理，因此需要特殊的微生物。近年来，国外已报道了有关选育耐盐(NaCl)菌处理高盐有机废水的报道，而对皂素废水这类高浓度有机物含量、高盐(CaCl2)、含难降解物质(皂素)复杂的废水，至今还属于研究之薄弱领域。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株耐氯菌株S616的应用。本专利技术所提供的耐氯菌株S616，为坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)S616 CCTCC NO.M205146，已于2005年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏号CCTCC NO.M205146。一株耐氯菌株S616的应用，其特征在于所述菌株的应用为坚强芽孢杆菌(Bacillusfirmus)S616 CCTCC NO.M205146应用于含高浓度氯离子废水的处理中。所述的一株坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)S616 CCTCC NO.M205146应用于含高浓度氯离子废水的处理方法为挑取坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)S616单菌落，于扩大培养基中培养20-24h，按培养后的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)S616∶含高浓度氯离子废水(如混合皂素废水)的体积比为(1-4)∶50取坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)S616接种于含高浓度氯离子废水(如混合皂素废水)中，30-40℃恒温培养，pH值为7.0-8.0，反应48-72小时。扩大培养基蛋白胨10g；牛肉膏5g；氯化钠；5g；蒸馏水1000ml；CaCl218.0g/L。本专利技术从皂素废水处理系统的厌氧活性污泥中筛选到一株在高浓度氯离子条件下具有一定生长能力的新菌株。耐氯菌株S616有良好的去除皂素废水中COD的能力，能在72小时之内去除废水中的COD 50-60％。附图说明图1-1a是菌株S616菌株电镜图片图1-1b是菌株S616菌株电镜图片图1-2是菌株S616在液体不同氯离子浓度的SC培养基上生长情况1-3是菌株S616的PCR产物琼脂糖电泳图(1核DNA，2扩增产物，MMarker)图1-4a是菌株S616在高氯离子、高COD浓度下的下降解效率1-4b是菌株S616在高氯离子、高COD浓度下的下降解效率1-4c是菌株S616在高氯离子、高COD浓度下的下降解效率1-4d是菌株S616在高氯离子、高COD浓度下的下降解效率图 具体实施例方式一、一株耐氯菌株S616的筛选方法(一)、材料准备1、菌源和实验废水(1)菌源处理皂素废水的生化系统中的活性污泥；(2)实验废水(即混合皂素废水)本实验废水取自湖北省十堰市方坤置业有限公司皂素生产废水；经内电解和CaO调配后，具体指标为pH＝7.5-8.2，COD＝4000-17000mg/L，Cl-＝8000-30000mg/L，NH4-N 140-300mg/L。2、培养基分离培养基CH3CH2COONa 30mmol，CH3CH2CH2COONa 30mmol，CH3CHOHCOONa30mmol，酵母菌2.0g，MgCl20.1g，NH4Cl 1.0g，K2HPO40.4g，刃天青0.002g，半胱氨酸0.5g，蒸馏水1000ml，pH＝7.0～7.3。筛选培养基MgSO4·7H2O，0.2g/L，KH2PO40.5g/L，K2HPO41.5g/L，NH4Cl 0.5/L，CaCl2135g/L，1ml微量元素溶液，溶入1L皂素废水(COD浓度为1000mg/L)，pH＝7.5，微量元素溶液FeCl3·6H2O 2g，CoCl22g，MnCl20.5g，CuCl20.03g，ZnCl20.05g，NiCl2.6H2O 0.05g，EDTA 1g，pH＝7.O。扩大培养基蛋白胨10g；牛肉膏5g；氯化钠；5g；蒸馏水1000ml；CaCl218.0g/L。SC培养基蛋白胨10g；牛肉膏5g；氯化钠；5g；蒸馏水1000ml；琼脂20g(固)；CaCl2的加入量为0-140g；当CaCl2加入量为0g时，SC培养基内＝3000mg/L。斜面培养基蛋白胨10g；牛肉膏5g；氯化钠；5g；磷酸二氢钾2g；氯化铵1g；琼脂20g；蒸馏水1000ml；CaCl218g/L，pH＝7.5。以上培养基分别于121℃高压灭菌30min后备用。3、实验仪器和设备国华SHA-B恒温振荡器，SHH150G光照生物培养箱，卧式压力蒸汽灭菌器，WMX-1型微波密封消解COD速测仪，722S分光光度计，光学显微镜，pH计，超净工作台，鼓风干燥箱，超薄切片机，日立H-7000FA投射显微镜，PTC200型PCR仪，电泳仪及电泳槽，凝胶紫外观测仪等。(二)、菌株的分离与筛选1).菌胶团的破碎取2g皂素废水处理系统中的厌氧活性污泥，加入事先灭菌好的装有100ml无菌水的250ml的三角瓶内，并加入重量为无菌水0.01％的焦磷酸钠，摇床振荡，将菌胶团打碎，得泥水混合物，备用；2).耐氯离子优势菌种的分离利用无菌移液管吸取0.5ml上述泥水混合物，加入分离培养基4.5ml，30-40℃(最佳35℃)厌氧恒温培养5-7天，待试管培养基变混浊，说明细菌已经生长，然后平板稀释涂布，挑取在菌落特征上有明显差异的单菌，直至获得单一菌株，并于斜面培养基上保存；3).耐氯离子优势菌种的筛选 挑取上述分离出的单菌落，分别接种子筛选培养基内，30-40℃(最佳35℃)厌氧恒温培养5-7天，观察菌悬液的混浊情况，变混浊的即为筛选出的耐氯离子的菌株；经过筛选，获得一株编号为菌株S616的菌株，即耐氯菌株S616。菌株S616在加入不同浓度氯离子的液体SC培养基上生长情况如附图1-2所示。二、耐氯微生物菌株鉴定1、对耐氯性能较强的菌株S616的鉴定对耐氯性能较强的菌株S616进行了生理生化的鉴定以及16S rDNA分子的鉴定，从分子水平确定耐氯菌株的种属。16S rDNA序列分析主要按照以下步骤①细菌核DNA的提取1)用高压灭菌的牙签挑单菌落接种于扩大培养基内培养过夜，取1.5ml菌液于Eppendorf管内，8,000rpm室温离心5min，彻底除去上清。2)加STE缓冲夜1.5ml洗涤一次，离心弃上清，再加入0.6mlTE溶液，重悬细菌。3)加30ul10mg/ml的溶菌酶，37℃水浴45min4)加65μl 10％的SDS，20mg/ml的蛋白酶K 3μl，50℃水浴2小时，至溶液变清。5)加入等积体酚氯仿抽提三次，直至看不到蛋白层为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株耐氯菌株Ｓ６１６的应用，其特征在于所述菌株的应用为坚强芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｆｉｒｍｕｓ）Ｓ６１６ＣＣＴＣＣＮＯ．Ｍ２０５１４６应用于含高浓度氯离子废水的处理中。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：信欣，王焰新，鲍建国，刘慧，杨雪芬，李平，
申请(专利权)人：中国地质大学武汉，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]