少根根霉葡萄糖淀粉酶基因及其内含子的人工剪接方法技术

由于根霉葡萄糖淀粉酶具有１００％降解生淀粉以及降解产物中非发酵性糖类少的优点，在酒精发酵工业中具有十分重要的应用价值。本发明专利技术首次从少根根霉中成功地克隆了少根根霉葡萄糖淀粉酶基因（ＲＡＧＡ），并通过ＰＣＲ技术人工剪除其内含子，构建了可在不同宿主中高效表达的ＲＡＧＡ基因。将本发明专利技术中的ＲＡＧＡ基因克隆到ｐＰＩＣ９表达载体，转化毕赤酵母，获得的工程菌株表达了有活性的葡萄糖淀粉酶蛋白。本发明专利技术的内含子人工剪接方法简便易行，准确可靠，为难以通过ＲＴ－ＰＣＲ方法和ｃＤＮＡ文库技术克隆基因编码序列而易于获得其基因组ＤＮＡ时人工剪除内含子，获得可在不同宿主中表达的基因开辟了一条新的途径。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种葡萄糖淀粉酶基因，其特征在于：能够在毕赤酵母和酿酒酵母中均能表达出有活性的少根根霉葡萄糖淀粉酶基因即ＲＡＧＡ基因，其基因的碱基序列及编码酶蛋白的氨基酸序列如下：１ＧＣＡＡＧＣＡＴＴＣＣＴＡＧＴＡＧＴＧＣＴＴＣＴＧＴＣＣＡＧＣ ＴＴＧＡＴＴＣＡＴＡＣＡＡＴＴＡＣＧＡＴＧＧＣＴＣＴＡＣＴ６０１ＡＳＩＰＳＳＡＳＶＱＬＤＳＹＮＹＤＧＳＴ２０６１ＴＴＴＴＣＡＧＧＡＡ ＡＡＡＴＴＴＡＴＧＴＣＡＡＧＡＡＣＡＴＴＧＣＴＴＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＧＧＴＴＡＣＴＧＴＡＡＴＴＴＡＣ１２０２１ＦＳＧＫＩＹＶＫＮＩＡＹＳＫＫＶＴＶＩＹ　 　４０１２１ＧＣＣＧＡＴＧＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＣＴＧＧＡＡＴＡＡＴＡＡＴＧＧＡＡＡＣＡＣＣＧＴＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＴＡＣＴＣＴＧＣＴ１８０４１ＡＤＧＳＤＮＷＮＮＮＧＮ　 　ＴＶＡＡＳＹＳＡ６０１８１ＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＴＡＣＧＡＡＴＡＣＴＧＧＡＣＡＴＴＣＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＴＡＡＴＧＧＴＡＴＣＡＡＧ２４０６１ＰＩＳＧ　 　ＳＮＹＥＹＷＴＦＳＡＳＩＮＧＩＫ８０２４１ＧＡＧＴＴＣＴＡＣＡＴＴＡＡＧＴＡＴＧＡＧＧＴＣＡＧＴＧＧＡＡＡＡＡＣＡＴＡＣＴＡＴＧＡＴＡＡＣＡＡＣＡＡＴＴＣＴＧＣＣ ３００８１ＥＦＹＩＫＹＥＶＳＧＫＴＹＹＤＮＮＮＳＡ１００３０１ＡＡＴＴＡＣＣＡＡＧＧＴＴＣＴＡＣＡＴＣＣＡＡＧＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣ ＴＡＣＴＧＣＴＡＣＴＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＣ３６０１０１ＮＹＱＧＳＴＳＫＰＴＴＴＴＡＴＡＴＴＴＴ１２０３６１ＧＣＴＣＣＴＴＣＣ ＡＣＴＴＣＡＡＣＣＡＣＧＡＣＴＣＣＣＣＣＣＴＣＡＡＧＣＴＣＴＧＡＧＣＣＡＧＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＡＡＣＴ４２０１２１ＡＰＳＴＳＴ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李明刚，杨立泉，戴小军，侯建华，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]