羊边界病毒抗体检测ELISA试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种羊边界病病毒重组E0 蛋白、E0蛋白在检测羊边界病毒抗体方面的应用及一种检测羊边界病毒抗体的ELISA试剂盒，该试剂盒含有BDV重组E0蛋白作为抗原包被的ELISA板。E0重组蛋白系将包含E0主要抗原区的基因片段克隆入原核表达载体pET‑32a (+)得到重组表达载体，具体来说，通过以下方法获得：根据BDV‑E0基因序列,设计一对特异引物,然后通过RT‑PCR方法对BDV的E0基因进行扩增，将E0基因定向插入到pET‑32a(+)表达载体，筛选获得阳性重组表达质粒pET‑32a(+)‑BDV‑E0，并将该质粒转化置BL21感受态细胞，再经ITPG诱导表达，获得BDV‑E0重组蛋白。

ELISA kit for detection of sheep border virus antibody

The invention discloses a ELISA kit using recombinant sheep border disease virus E0 protein and E0 protein in the detection of border virus antibody and detection of a border virus antibody, the kit coated ELISA plates containing BDV recombinant E0 protein as antigen. The recombinant protein E0 system will contain E0 main antigen region gene fragment was cloned into the prokaryotic expression vector pET (+) 32A obtained recombinant expression vector, specifically, obtained by the following methods: according to the BDV E0 gene sequence, a pair of primers was designed by RT PCR method, then E0 gene of BDV insert the E0 gene amplification, directed to pET 32A (+) expression vector, the recombinant plasmid of pET (+) 32A screening BDV E0, and the plasmid was transformed into BL21 competent cells and induced by ITPG expression, BDV recombinant protein E0.

【技术实现步骤摘要】
羊边界病毒抗体检测ELISA试剂盒
本专利技术属于分子生物学领域，涉及一种羊边界病毒重组E0蛋白和羊边界病毒抗体的ElISA试剂盒及检测方法。
技术介绍
羊边界病毒(Borderdiseasevirus；BDV)因首先发现于英格兰和威尔士的边界地区而得此名，又称羔羊被毛颤抖病(Hairyshakerdiseaseoflambs)，是由边界病病毒引起新生羔羊以身体多毛，生长不良和神经异常为主要特征的一种先天性传染病。边界病病毒有免疫抑制作用，怀孕期感染边界病病毒后，无论胎儿是否具有免疫应答能力，病毒均可在体内的各种组织中持续存在而成为病毒的携带者和疾病的传染源。被感染的羔羊在生长成熟后的几年内，仍具有对其后代的感染性，子宫和卵巢或睾丸生殖细胞中存在的病毒，可经胎盘和精液发生垂直传播。感染了边界病病毒的成年羊主要表现为繁殖力下降和流产,羔羊表现为发育不良和畸形，多见断奶羊死亡。边界病的发现距今已有50多年，然在国内却鲜见关于BDV的研究报道。自2013年李文良等人成功从持续性腹泻山羊病例中分离出BDV，首次证实了边界病在我国的存在。然而多数羊群发生BDV感染，或无明显临床症状，或为持续性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羊边界病病毒重组E0蛋白，其特征在于：所述E0蛋白是由E0序列编码的。

【技术特征摘要】
1.一种羊边界病病毒重组E0蛋白，其特征在于：所述E0蛋白是由E0序列编码的。2.根据权利要求1所述的羊边界病病毒重组E0蛋白，其特征在于：所述E0序列为羊边界病病毒基因组中第951bp-1870bp的碱基。3.根据权利要求1所述的羊边界病病毒重组E0蛋白，其特征在于，所述E0蛋白系将包含E0主要抗原区的基因片段克隆入原核表达载体pET-32a（+）得到重组表达载体，将该重组表达载体转化BL21感受态细胞，于37℃培养，待OD600值达到0.5-0.6时，加入IPTG至终浓度为1.0mmol/L进行诱导表达，经亲和柱纯化获得。4.一种羊边界病病毒重组E0蛋白的制备方法，包括如下步骤：（1）根据边界病病毒基因序列设计引物P1:GCCGAATTCATCGTAAGTAGGCGTGATTGC（SEQIDNO.1）、P2:CCCAAGCTTGCTACGATCGAAGTTCAGTTT（SEQIDNO.2），通过RT-PCR方法对BDV的E0基因进行扩增，以EcoRI和HindⅢ同时对BDV基因RT-PCR产物和pET-32a(+)载体进行酶切，把所述的基因片段克隆入原核表达载体中，然后通过...

【专利技术属性】
技术研发人员：许传田，李继奎，鲁梅，黄庆华，崔宁，杜娟，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37