一种甲胎蛋白检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术提供一种甲胎蛋白检测试剂盒及其检测方法，属于荧光免疫分析领域。该试剂盒是通过在96孔板上依次吸附捕获抗体、AFP和一抗来形成类似夹心式的结构，后续依次加入生物素标记的二抗、酪氨酸酶‑链霉亲和素偶联物，酪氨酸酶与二抗的偶联物特异性地与检测一抗结合，最后加入底物酪胺，在酪氨酸酶作用下生成多巴胺，与后续加入的间苯二酚在碱性条件下反应生成强荧光发射的基团，进而实现对AFP的定量检测。该试剂盒的检测结果与标准ELISA方法相符，证明该试剂盒可通过荧光激活而灵敏检测AFP，并最终成功用于诊断肝癌疾病。同时，该方法具有普适性，只需根据不同的靶标抗原更换相应的捕获抗体和检测一抗，就可将其应用拓展到其他抗原的检测。

A test kit for alpha fetoprotein detection and its detection method

【技术实现步骤摘要】
一种甲胎蛋白检测试剂盒及其检测方法
本专利技术属于荧光免疫分析领域，具体涉及一种甲胎蛋白检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
中国抗癌协会最近的数据表明，在中国每天有近6000人死于癌症，癌症成为最常见的致死原因，在全球范围内癌症将成为未来几十年发病和死亡的主要原因之一。因此，癌症生物标志物的灵敏检测对早期临床诊断，疾病预防和生物医学研究越来越重要。电化学、荧光、微流控芯片、裸眼睛检测和表面等离子体共振传感等方法已经成功地用于癌症生物标志物的检测，并取得了重大进展。值得注意的是，荧光免疫分析由于其高灵敏度、高通量和效率已经得到越来越多关注。甲胎蛋白(AFP)是肝癌患者血清中的一个重要标志物，正常成年人血清中AFP含量通常低于20ng/mL，甚至低于5ng/mL，而肝癌患者血清中AFP含量异常升高，通常大于400ng/mL。因此，AFP的准确定量对肝癌疾病的诊断和预防具有重大意义。在众多免疫分析方法中，酶联免疫吸附测试(ELISA)是最常见的免疫分析方法之一，ELISA是将抗原抗体特异性识别作用和酶的生物催化性质相结合，并以酶作为信号输出单元而实现抗原高灵敏检测的技术。基于贵金属纳米粒子本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甲胎蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括：AFP捕获抗体、AFP检测一抗、AFP标准溶液、生物素标记的二抗、酪氨酸酶‑链霉亲和素偶联物、包被缓冲液、洗涤液、样品稀释液、酪胺、间苯二酚和碳酸钠。

【技术特征摘要】
1.一种甲胎蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括：AFP捕获抗体、AFP检测一抗、AFP标准溶液、生物素标记的二抗、酪氨酸酶-链霉亲和素偶联物、包被缓冲液、洗涤液、样品稀释液、酪胺、间苯二酚和碳酸钠。2.根据权利要求1所述的一种甲胎蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的包被缓冲液是pH＝8.0～9.6的10～100mM碳酸盐，洗涤缓冲液是pH＝7.4的含有0.05～0.5％Tween-20和10～100mM磷酸根/磷酸氢根/磷酸二氢根的混合溶液；样品稀释液是含牛血清蛋白的缓冲液。3.根据权利要求1-2任何一项所述的一种检测方法，其特征在于，该方法包括：步骤一：将酪氨酸酶和生物素3-磺基-N-羟基琥珀酰亚胺酯钠盐溶于磷酸缓冲溶液中，室温下孵育60min得到生物素标记的酪氨酸酶，用截留分子量30kDa的AmiconUltra离心管离心纯化，重复3次，然后将链霉亲和素加入纯化后的生物素-酪氨酸酶偶联物，室温下孵育30-60min，得到酪氨酸酶-链霉亲和素偶联物；步骤二：将AFP捕获抗体用包被稀释液稀释200倍，取100μL加入96孔板后在4℃静置包被过夜或者室温包被2.5h，弃去孔内液体并用300μL洗涤缓冲液冲洗，在孔内加入200μL0.01mg/mL样品稀释液，37℃封闭1h后弃去孔内液体，再用300μL洗涤缓冲液冲洗，之后加入AFP标准溶液并在37℃孵育1h，弃去孔内液体后用300μL洗涤缓冲液冲洗96孔板，加入100μL稀释后的AFP检测一抗，37℃孵育1h后弃去孔内液体后并冲洗，加入100μL生物素标记的二抗，37℃孵育1h后弃去孔内...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨秀荣，赵佳会，孙健，邢志财，
申请(专利权)人：中国科学院长春应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：吉林,22