一种靶向胶质瘤的复合纳米制剂、其制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种靶向胶质瘤的复合纳米制剂、其制备方法及其应用,该靶向胶质瘤的复合纳米制剂是采用包载材料氯沙坦‑壳聚糖‑聚聚乙烯亚胺载体共聚物包覆包载物递送肝癌衍生生长因子shRNA后组装成鼻用纳米复合物，粒径为50nm‑250nm；制备方法是：将壳聚糖与高碘酸钾经过氧化反应得到氧化壳聚糖；氧化壳聚糖与聚乙烯亚胺反应生成壳聚糖‑聚乙烯亚胺共聚物；壳聚糖‑聚乙烯亚胺共聚物与羧基化的氯沙坦发生席夫碱反应得到氯沙坦‑壳聚糖‑聚聚乙烯亚胺载体共聚物；氯沙坦‑壳聚糖‑聚聚乙烯亚胺载体共聚物与shHDGF组装成鼻用纳米复合物。该制剂制备成鼻腔用制品后具有良好的脑部胶质瘤靶向性。

A compound nanoscale preparation, preparation and application of a target glioma

The invention provides a composite nano targeted glioma preparation, preparation method and application thereof, the target compound nano preparation of gliomas is loaded with losartan chitosan poly materials polyethyleneimine copolymer covering the carrier carrier delivery of hepatoma derived growth factor after shRNA assembled into nasal nanocomposites. The particle size of 50nm 250nm; the preparation method is: Chitosan and potassium periodate oxidation reaction of chitosan after oxidation; oxidation reaction of polyethyleneimine chitosan and chitosan polyethyleneimine copolymer; chitosan polyethylene imide copolymer and carboxylated Schiff reaction occurred with losartan losartan shell chitosan poly polyethyleneimine copolymer carrier; losartan chitosan poly polyethyleneimine copolymer and shHDGF carrier assembly nasal nanocomposites. This preparation is prepared as a nasal product and has a good targeting of brain glioma.

【技术实现步骤摘要】
一种靶向胶质瘤的复合纳米制剂、其制备方法及其应用
本专利技术涉及药物制剂领域，具体涉及递送肝癌衍生生长因子shRNA的靶向胶质瘤的鼻用纳米复合物、其制备方法及其用途。
技术介绍
恶性胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，发病率约占原发性恶性脑肿瘤的80％，复发率和死亡率极高。贯穿全脑的快速侵袭性生长是恶性胶质瘤突出的生物学特征，也是其治疗的最大障碍和预后不良的根本原因，临床上恶性胶质瘤患者即便手术治疗联合放疗、化疗等措施，患者的平均生存期也仅为15个月左右。目前对恶性胶质瘤仍缺乏有效的治疗方法。因此，进行胶质瘤治疗方法的研究具有十分重要的意义。胶质瘤的基因治疗近年来成为了研究热点。广义来说，基因治疗是指把某些遗传物质转移到患者体内，使其在体内表达，最终达到治疗某种疾病的方法。与传统的手术、放疗、化疗法相比，基因治疗具有毒副作用小、安全性更高的优点。肝癌衍生生长因子(Hepatoma-derivedgrowthfactor，HDGF)与恶性肿瘤侵袭性生长等生物学特性的关系已成为近十年来研究的焦点。大量临床研究显示，HDGF在包括胶质瘤在内的多种人类恶性肿瘤如肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、鼻咽癌及前列腺癌等中均高表达，并且其表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关，HDGF被认为是一个广谱的肿瘤预后标志物；在胶质瘤中，HDGF表达下调可使胶质瘤细胞恶性表型受到抑制，其生长、迁移能力均显著下降，此外下调HDGF的表达还可抑制肿瘤血管生成；上述研究表明HDGF恶性行为对胶质瘤的侵袭性生长发挥着重要作用，亦提示HDGF是一个极有潜力的治疗恶性胶质瘤的基因治疗新靶标。短发夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)治疗是基因治疗的重要手段。该技术广泛应用于下调特定基因的表达，为包括肿瘤在内的许多重大疾病的治疗以及有效治疗靶点的识别和确认开辟了一条新思路，具有非常广阔的应用前景。与DNA治疗相比，RNA治疗具有长效、稳定表达的优点。所以HDGFshRNA可以特异性下调胶质瘤中HDGF的表达，有效抑制胶质瘤的侵袭、迁移、增殖等恶性表型，从而改善胶质瘤预后。然而，在HDGFshRNA(shHDGF)治疗脑胶质瘤的研究中，血脑屏障的存在使其难以进入脑部发挥作用，如何安全高效递送shHDGF入脑是亟需解决的一个关键问题。大量证据表明鼻腔给药是一种实用的无创性脑部递药方式，由于鼻粘膜在解剖生理上与脑部存在着独特的直接联系，经鼻腔给药后，药物可以绕过血脑屏障经鼻粘膜上的嗅通路和三叉神经通路直达中枢神经系统，入脑迅速。例如神经生长因子、胰岛素、干扰素β-1b和胆囊收缩素等多肽蛋白类药物经鼻给药后均可到达脑部发挥作用。因此，鼻腔给药可以为shHDGF入脑治疗胶质瘤提供一种安全、有效、便捷的给药途径。鼻脑通路的存在为经鼻入脑提供了可能，但shHDGF易被鼻纤毛清除，并且极易被核酸酶降解，使得经鼻入脑量很低，在靶部位无法达到有效剂量。因此，为了提高shHDGF的稳定性，延长shHDGF在鼻粘膜的滞留时间，将其高效递送到脑部胶质瘤的肿瘤组织，很有必要开发一种安全、高效的靶向传递系统。目前，没有靶向递送shHDGF入脑部胶质瘤的鼻用纳米复合物的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有治疗胶质瘤的鼻用制剂的缺陷，提供一种递送肝癌衍生生长因子shRNA的靶向胶质瘤的鼻用纳米复合物，其制备方法及其应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用了以下的技术方案：靶向胶质瘤的复合纳米制剂，是采用包载材料氯沙坦-壳聚糖-聚聚乙烯亚胺载体共聚物包覆包载物后组装成鼻用纳米复合物，粒径为50nm-250nm，包载物为递送肝癌衍生生长因子shRNA。所述聚乙烯亚胺的分子量范围为400Da-2.5kDa。氯沙坦-壳聚糖-聚聚乙烯亚胺载体共聚物(LCP)与shHDGF的N/P比大于2.5，且小于8，因为当氮磷比(N/P，N指含氮物质载正电荷数，P指shHDGF中磷酸酯荷负电数)大于等于2.5时，共聚物LCP可以完全包载shHDGF，制备的纳米粒大小均一，形状为类球形，粒径介于50nm-250nm之间。上述靶向胶质瘤的复合纳米制剂的制备方法，步骤如下：(1)将壳聚糖与高碘酸钾经过氧化反应得到氧化壳聚糖；(2)氧化壳聚糖与聚乙烯亚胺反应生成壳聚糖-聚乙烯亚胺共聚物；(3)壳聚糖-聚乙烯亚胺共聚物与羧基化的氯沙坦发生席夫碱反应得到氯沙坦-壳聚糖-聚聚乙烯亚胺载体共聚物；(4)氯沙坦-壳聚糖-聚聚乙烯亚胺载体共聚物与shHDGF组装成鼻用纳米复合物。采用天然多糖壳聚糖作为结构骨架，既可以提高粒子的生物相容性和生物可降解性，又能增加鼻粘膜粘性，增加粒子入脑量。选用低分子量聚乙烯亚胺作为阳离子材料，既能降低载体材料毒性，又能保证有效的细胞摄取效率。选用胶质瘤高表达的氯沙坦作为纳米粒靶头，不仅使得粒子具有主动靶向性，又能和氯沙坦抑制血管生成的自身功能相结合，增强粒子的作用效果。选用shHDGF作为被递送药物，强调了HDGF在胶质瘤治疗中的特异性。原理说明：专利技术人首先将人工合成的低毒、低分子量(分子量为1800Da)的阳离子聚合物聚乙烯亚胺(Polyethylenimine，PEI)接枝在具有高度生物相容性、生物可降解性及生物安全性等优点的天然阳离子多糖壳聚糖(Chitosan，CS)骨架上，形成阳离子壳聚糖-聚乙烯亚胺共聚物Chitosan-graft-polyethylenimine(CS-g-PEI，CP)。CP与HDGFshRNA通过静电相互作用自组装形成纳米复合物CP/shHDGF，空间位阻的存在可有效保护shHDGF分子免受核酸酶降解；壳聚糖良好的生物粘附性和渗透促进作用可延长该纳米复合物在鼻粘膜的滞留时间并可提高shHDGF的脑部转运量。但是，想要高效将shHDGF经鼻递送到脑胶质瘤部位，还要求shHDGF递送系统具有一定的主动靶向性。血管紧张素II(AngII)是一种多功能生物活性多肽，对血压具有非常关键的调节作用。近年来大量研究表明血管紧张素II可以通过血管紧张素1型受体受体(AngiotensinIItype1receptor，AT1R)调节肿瘤血管的生成和进程。临床研究显示血管紧张素II1型受体在人脑胶质瘤中高表达，且胶质瘤恶性程度越高，则AT1R的表达越强。所以专利技术人猜想，以AT1R拮抗剂作为递送载体靶头，使其与肿瘤表面高表达的AT1R特异性结合，就可以有效靶向递送shHDGF达到胶质瘤细胞表面，具有靶向性。不仅如此，Rivera[RiveraE，ArrietaO，GuevaraP，etal.AT1receptorispresentingliomacells；itsblockagereducesthegrowthofratglioma.BrJCancer.2001；85:1396-1399.]等人也证明在大鼠胶质瘤细胞株C6上检测到了AT1R，并且在胶质瘤大鼠模型上发现AT1R拮抗剂氯沙坦能显著抑制C6细胞的生长和肿瘤血管生成；近年来多项研究发现AT1R在肿瘤生长及肿瘤血管生成方面发挥着重要作用；因此，AT1R拮抗剂除了具有胶质瘤细胞表面靶向性之外，还具有抑制胶质瘤细胞生长的功能。然而，AT1R拮抗剂有很多种，比如坎地沙坦、氯沙坦、缬沙坦、厄贝沙本文档来自技高网...

【技术保护点】
靶向胶质瘤的复合纳米制剂，其特征在于是采用包载材料氯沙坦‑壳聚糖‑聚聚乙烯亚胺载体共聚物包覆包载物后组装成鼻用纳米复合物，粒径为50nm‑250nm，包载物为递送肝癌衍生生长因子shRNA，氯沙坦‑壳聚糖‑聚聚乙烯亚胺载体共聚物与shHDGF的N/P比在2.5‑8范围内。

【技术特征摘要】
1.靶向胶质瘤的复合纳米制剂，其特征在于是采用包载材料氯沙坦-壳聚糖-聚聚乙烯亚胺载体共聚物包覆包载物后组装成鼻用纳米复合物，粒径为50nm-250nm，包载物为递送肝癌衍生生长因子shRNA，氯沙坦-壳聚糖-聚聚乙烯亚胺载体共聚物与shHDGF的N/P比在2.5-8范围内。2.根据权利要求1所述的靶向胶质瘤的复合纳米制剂，其特征在于氯沙坦-壳聚糖-聚聚乙烯亚胺载体共聚物与shHDGF的N/P比为8。3.根据权利要求1所述的靶向胶质瘤的复合纳米制剂，其特征在于所述聚乙烯亚胺的分子量范围...

【专利技术属性】
技术研发人员：李瑞，张爱霞，张明晚，周美玲，苏平，黄元，沈鸿，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32