一种重组葡激酶及其高效分泌表达的方法技术

一种葡萄球菌激酶及利用生物技术高效分泌表达重组葡萄球菌激酶的方法。它以金黄色葡萄球菌的总ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得含信号肽的葡激酶（Ｓａｋ）基因。该基因序列第３３、３４及３６位氨基酸，不同于已报道的Ｓａｋ基因。将该基因与载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１进行连接，转化宿主菌，获得的重组工程菌，经ＩＰＴＧ诱导可分泌表达具有纤溶酶原激活作用的重组葡激酶。采用本发明专利技术方法表达重组葡激酶蛋白，基因表达水平高，表达产物主要为分泌型蛋白，并以活性状态存在于菌体外胞质及胞外，因此，纯化工艺简单，产量高，生产成本低。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种葡萄球菌激酶，其核苷酸序列如下：　　　　ｔｃａ　　ａｇｔ　　ｔｃａ　　ｔｔｃ　　ｇａｃ　　ａａａ　　ｇｇａ　　ａａａ　　ｔａｔ　　ａａａ　　ａａａ　　ｇｇｃ　　ｇａｔ　　ｇａｃ　　ｇｃｇ　　ａｇｔ　　４８　　　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｐｈｅ　　Ａｓｐ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｙ　　Ｌｙｓ　　Ｔｙｒ　　Ｌｙｓ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｙ　　Ａｓｐ　　Ａｓｐ　　Ａｌａ　　Ｓｅｒ　　　　１　　５　　１０　　１５　　　　ｔａｔ　　ｔｔｔ　　ｇａａ　　ｃｃａ　　ａｃａ　　ｇｇｃ　　ｃｃｇ　　ｔａｔ　　ｔｔｇ　　ａｔｇ　　ｇｔａ　　ａａｔ　　ｇｔｇ　　ａｃｔ　　ｇｇａ　　ｇｔｔ　　９６　　　　Ｔｙｒ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｕ　　Ｐｒｏ　　Ｔｈｒ　　Ｇｌｙ　　Ｐｒｏ　　Ｔｙｒ　　Ｌｅｕ　　Ｍｅｔ　　Ｖａｌ　　Ａｓｎ　　Ｖａｌ　　Ｔｈｒ　　Ｇｌｙ　　Ｖａｌ　　　　２０　　２５　　３０　　　　ｇａｇ　　ｇｇｔ　　ａａａ　　ｇａａ　　ａａｔ　　ｇａａ　　ｔｔｇ　　ｃｔａ　　ｔｃｃ　　ｃｃｔ　　ｃａｔ　　ｔａｔ　　ｇｔｃ　　ｇａｇ　　ｔｔｔ　　ｃｃｔ　　１４４　　　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｙ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ａｓｎ　　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｈｉｓ　　Ｔｙｒ　　Ｖａｌ　　Ｇｌｕ　　Ｐｈｅ　　Ｐｒｏ　　　　３５　　４０　　４５　　　　ａｔｔ　　ａａａ　　ｃｃｔ　　ｇｇｇ　　ａｃｔ　　ａｃａ　　ｃｔｔ　　ａｃａ　　ａａａ　　ｇａａ　　ａａａ　　ａｔｔ　　ｇａａ　　ｔａｃ　　ｔａｔ　　ｇｔｃ　　１９２　　　　Ｉｌｅ　　Ｌｙｓ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ　　Ｔｈｒ　　Ｔｈｒ　　Ｌｅｕ　　Ｔｈｒ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｌｙｓ　　Ｉｌｅ　　Ｇｌｕ　　Ｔｙｒ　　Ｔｙｒ　　Ｖａｌ　　　　５０　　５５　　６０　　　　ｇａａ　　ｔｇｇ　　ｇｃａ　　ｔｔａ　　ｇａｔ　　ｇｃｇ　　ａｃａ　　ｇｃａ　　ｔａｔ　　ａａａ　　ｇａｇ　　ｔｔｔ　　ａｇａ　　ｇｔａ　　ｇｔｔ　　ｇａａ　　２４０　　　　Ｇｌｕ　　Ｔｒｐ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ　　Ａｓｐ　　Ａｌａ　　Ｔｈｒ　　Ａｌａ　　Ｔｙｒ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｐｈｅ　　Ａｒｇ　　Ｖａｌ　　Ｖａｌ　　Ｇｌｕ　　　　６５　　７０　　７５　　８０　　　　ｔｔａ　　ｇａｔ　　ｃｃａ　　ａｇｃ　　ｇｃａ　　ａａｇ　　ａｔｃ　　ｇａａ　　ｇｔｃ　　ａｃｔ　　ｔａｔ　　ｔａｔ　　ｇａｔ　　ａａｇ　　ａａｔ　　ａａｇ　　２８...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：乐超银，刘敏，郭政红，谢伟，梁薇，姚伟，梁宏伟，陈发菊，陈凡，戴建武，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：42[中国|湖北]