添加α－酮戊二酸脱氢酶抑制剂实现α－酮戊二酸过量积累的方法技术

一种添加α－酮戊二酸脱氢酶抑制剂实现α－酮戊二酸过量积累的方法，属于蛋白质水平的代谢调控优化发酵过程技术领域。本发明专利技术利用多重维生素营养缺陷型的光滑球拟酵母ＣＣＴＣＣ　　Ｍ２０２０１９为生产菌株，通过在培养基中添加α－酮戊二酸脱氢酶抑制剂：过氧化氢、甲氨蝶呤、次氯酸钠或羟基硫氨，调节α－酮戊二酸脱氢酶活性，有目的的降低α－酮戊二酸脱氢酶活性，减少代谢过程中α－酮戊二酸的降解，达到过量积累α－酮戊二酸的目的。本发明专利技术利用调控工业微生物中碳代谢和碳代谢流流向分布，使碳代谢流截止在α－酮戊二酸这一节点上，其中α－酮戊二酸最大产量达到２３．２ｇ／Ｌ，比对照提高了１２．２％。本发明专利技术为ＴＣＡ循环中间代谢产物的发酵研究提供了一个新的思路。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种添加α－酮戊二酸脱氢酶抑制剂实现α－酮戊二酸过量积累的方法，其特征是利用多重维生素营养缺陷型的光滑球拟酵母（Ｔ．ｇｌａｂｒａｔａ）ＣＣＴＣＣＭ２０２０１９为生产菌株，通过在培养基中添加α－酮戊二酸脱氢酶抑制剂：过氧化氢、甲氨蝶呤、次氯酸钠或羟基硫氨，调节α－酮戊二酸脱氢酶活性，有目的的减少α－酮戊二酸的降解，使碳流截止在α－酮戊二酸这一节点上，实现α－酮戊二酸过量积累；调控方法为：发酵４０ｈ，在发酵培养基中添加过氧化氢达５ｍＭ时，α－酮戊二酸积累量达到２３．２ｇ／Ｌ；或发酵初期０ｈ，在发酵培养基中添加甲氨蝶呤达０．０８μＭ时，α－酮戊二酸积累量达到２２．７ｇ／Ｌ；或发酵初期０ｈ，在发酵培养基中添加次氯酸钠达０．４ｍＭ时，α－酮戊二酸积累量达到２２．２ｇ／Ｌ；或发酵初期０ｈ，在发酵培养基中添加羟基硫氨达０．４８μＭ时，α－酮戊二酸积累量达到２２．０ｇ／Ｌ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，张旦旦，刘立明，堵国成，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]