一种重组大肠杆菌高效表达β-葡聚糖酶的方法技术

一种重组大肠杆菌高效表达β－葡聚糖酶的方法，属于发酵工程领域。本发明专利技术采用异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）和乳糖联合诱导，大幅提高了重组大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ　　ＢＬ２１（ＤＥ３）－ｐＥＴ２８ａ（＋）－ｂｇｌ）ＣＧＭＣＣ　　Ｎｏ．２４７０表达β－葡聚糖酶的水平和胞外酶占总酶活的比例，在初始发酵培养基（ＴＢ培养基）中，总酶活可达１８８３．３Ｕ／ｍＬ，其中胞外酶活可达１０２４．３Ｕ／ｍＬ，占总酶活的５４．４％。本发明专利技术可应用于相关工业生产。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种重组大肠杆菌高效表达β－葡聚糖酶的方法，其特征是以Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）－ｐＥＴ２８ａ（＋）－ｂｇｌ即ＣＧＭＣＣＮｏ．２４７０为出发菌株，种子液以ＯＤ↓［６００］值０．３５为分值，接种量为培养基体积的１０％，种子液的ＯＤ↓［６００］值以分值ＯＤ↓［６００］值０．３５进行反比例计算接入培养基的体积，种子液接入ＴＢ培养基中，３７℃、２００ｒ／ｍｉｎ振荡培养至ＯＤ↓［６００］＝１．２－１．５，加入０．０３３６ｍｍｏｌ／Ｌ的经异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷和１０ｍｍｏｌ／Ｌ的乳糖诱导，２４℃、２００ｒ／ｍｉｎ振荡诱导９ｈ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李崎，李永仙，郑飞云，刘春凤，顾国贤，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]