厌氧反硝化细菌筛选用培养基及筛选厌氧反硝化细菌的方法，它涉及一种反硝化细菌筛选用培养基及筛选反硝化细菌的方法。本发明专利技术解决了现有的厌氧反硝化细菌分离困难、分离周期长，最后分离到的菌株反硝化效能低的问题。厌氧反硝化细菌筛选用培养基分液体筛选用培养基和固体筛选用培养基两种。菌株的筛选：一、取污水或活性污泥；二、配制筛选用培养基；三、固体培养基分离；四、液体富集；五、重复三至四的操作；六、功能验证；选取性能优异的菌株即可。本发明专利技术筛选的菌株能去除硝酸盐，且去除率高。筛选用培养基的针对性强。本发明专利技术方法简单有效、分离快速、培养周期短、工作效率高，并筛选出目前筛选不到的污水处理性能优异的菌株。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种反硝化细菌筛选用培养基及筛选反硝化细菌的方法。技术背景现有厌氧反硝化细菌的分离周期较长，同时不易获得纯菌株，即使获得了 菌株，也没有很好的硝酸盐和亚硝酸盐的降解效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有的厌氧反硝化细菌分离困难、分离周期长， 最后分离到的菌株反硝化效能低的问题，提供了一种厌氧反硝化细菌筛选用培 养基及筛选厌氧反硝化细菌的方法。本专利技术厌氧反硝化细菌筛选用培养基分液体筛选用培养基和固体筛选用培养基两种；每升液体筛选用培养基是由3.0~5.0g KN03、 3.0~5.0g NaN03、 0.01 0.06g MgS04'7H20、 1.0~3.0g K2HP04、8 15g酒石酸钾钠、0.5 2g KH2P04、 0.1 2gFeCl2'6H2O、 0.1~2g CaCl2'2H20、 0.3 0.8g L-半胱氨酸和余量的蒸馏水 组成，液体筛选用培养基的pH值为7.5;每升固体筛选用培养基是由3.0 5.0g KN03、 3.0~5.0g NaN03、 0.01~0.06g MgS04'7H20、 1.0 3.0g K2HP04、 8~15g 酒石酸钾钠、0.5~2gKH2PO4、 0.1 2gFeCl2.6H2O、 0.1~2g CaCl2.2H20、 10~15g 琼脂粉、0.05~0.4mL浓度为0.2 0.4g/L的刃天青溶液、0.3~0.8g L-半胱氨酸和 余量的蒸馏水组成，固体筛选用培养基的pH值为7.5。本专利技术的液体培养基和固体培养基均处于厌氧状态。本专利技术厌氧反硝化细菌的筛选方法是按下述步骤实现的 一、配制上述的 厌氧反硝化细菌液体筛选培养基和固体筛选培养基；二、取厌氧去除氮工艺的 污水或活性污泥，在厌氧条件下进行倍比稀释；三、固体培养基分离将步骤 一配制固体筛选用培养基在沸水浴中融化，然后冷却至45 55。C，迅速将步骤 二稀释的污水或活性污泥用注射器注入固体培养基中，采用Hungate厌氧及"滚 管"方法在冷水中混合，然后放入恒温培养箱中在厌氧、35 38。C条件下培养，直至长出菌落；四、液体培养基富集挑取步骤三培养的单菌落接种到步骤一 配制的液体筛选用培养基，厌氧环境下培养7天 14天；五、分离纯化；六、 重复步骤三至五操作进行多分离纯化，直至获得纯菌株；七、对步骤六得到的 纯菌株性能检测，选取厌氧反硝化性能优异的菌株，即完成对厌氧反硝化细菌 菌株的筛选。本专利技术整个筛选过程在厌氧条件下进行。步骤三中冷水的水温为l(TC。 步骤五中分离纯化是对液体培养富集的菌液进行镜鉴以及革兰氏染色，去除重 复菌株。本专利技术采用滚管培养固体筛选用培养基、进行多次的分离纯化，在厌氧条 件下，縮短了培养周期，获得厌氧反硝化细菌菌株的同时减少工作量。本专利技术 筛选的厌氧反硝化细菌对N(V的最高去除率达到了 47.1%。附图说明图1是F1菌单株原子力扫描电镜照片。图2是F1菌对硝酸盐的去除率曲 线图，-"代表NCV的浓度变化，4-代表N03'的浓度变化，-x-代表N(V的去 除率。图3是F1菌对硫酸盐的利用率的曲线图。图4是具体实施方式九中Fl 菌株和相近的菌株16S rDNA序列构建的NJ系统发育树。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方 式间的任意组合。具体实施方式一本实施方式中厌氧反硝化细菌筛选用培养基分液体筛选 用培养基和固体筛选用培养基两种；每升液体筛选用培养基是由3.0~5.0gKN03、 3.0~5.0g NaN03、 0.01~0.06g MgS04'7H20、 1.0~3.0g K2HP04、 8~15g 酒石酸钾钠、0.5~2gKH2PO4、 0.1~2gFeCl2'6H2O、 (U 2gCaCl2'2H20、 0.3 0.8g L-半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，液体筛选用培养基的pH值为7.5;每升固 体筛选用培养基是由3.0~5.0g KN03 、 3.0~5.0g NaN03 、 0.01~0.06g MgS04.7H20、 1.0~3.0gK2HPO4、 8 15g酒石酸钾钠、0.5~2gKH2P04、 0.1 2g FeCl2.6H20、 0.1~2g CaCl2.2H20、 10~15g琼脂粉、0.05~0.4mL浓度为0.2 0.4g/L 的刃天青溶液、0.3 0.8gL-半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，固体筛选用培养基 的pH值为7.5。本实施方式的液体培养基和固体培养基均处于厌氧状态。具体实施方式二本实施方式与具体实施方式一不同的是每升液体筛选用 培养基是由2.0gKNO3、 2.0gNaNO3、 0.03gMgS04'7H20、 0.5g K2HP04、 10g 酒石酸钾钠、1.0gKH2PO4、 0.5gFeCl2.6H2O、 0.2gCaCl2.2H20、 0.5gL-半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，液体筛选用培养基的pH值为7.5。 本实施方式的液体培养基处于厌氧状态。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一不同的是每升固体筛选用 培养基是由2.0gKNO3、 2.0gNaNO3、 0.03g MgS04'7H20、 0.5gK2HPO4、 10g 酒石酸钾钠、1.0gKH2PO4、 0.5gFeCl2'6H2O、 0.2gCaCl2.2H20 、 12g琼脂粉、 0.1mL浓度为0.2g/L的刃天青溶液、0.5gL-半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，固 体筛选用培养基的pH值为7.5。本实施方式的固体培养基处于厌氧状态。具体实施方式四本实施方式中厌氧反硝化细菌的筛选方法整个筛选过程 在厌氧条件下进行，方法是按下述步骤实现的 一、配制如权利要求l所述的 厌氧反硝化细菌液体筛选培养基和固体筛选培养基；二、取厌氧去除氮工艺的 污水或活性污泥，在厌氧条件下进行倍比稀释；三、固体培养基分离将步骤 一配制固体筛选用培养基在沸水浴中融化，然后冷却至45 55"C，迅速将步骤 二稀释的污水或活性污泥用注射器注入固体培养基中，采用Hungate厌氧及"滚 管"方法在冷水中混合，然后放入恒温培养箱中在厌氧、35 38"C条件下培养， 直至长出菌落；四、液体培养基富集挑取步骤三培养的单菌落接种到步骤一 配制的液体筛选用培养基，厌氧环境下培养7天 14天；五、分离纯化；六、 重复步骤三至五操作进行多分离纯化，直至获得纯菌株；七、对步骤六得到的纯菌株性能检测，选取厌氧反硝化性能优异的菌株，即完成对厌氧反硝化细菌 菌株的筛选。本实施方式步骤一中采用蒸煮方法配制液体培养基，在蒸煮过程中通入高纯氮气(高纯氮气中氧气浓度^2ppm)以驱除氧气，同时向培养基中加入还原 剂(L-半胱氨酸)，利用其还原作用去除氧，降低氧化还原电位，使氧化还原 电位(ORP)低于-100mV，由此液体培养基处于厌氧状态。本实施方式在步 骤一中采用蒸煮方法配制固体培养基，在煮沸之前，需不断搅拌，防止琼脂凝 固在锅底。在煮沸之前加入0.2%的刃天青溶液(指示剂)待培养基煮沸后，加入L-半胱氨酸0.5g，通入高纯氮气驱氧30min，然后在12rC条件下灭菌 20min。本实施方式中将厌氧工艺的污水或活性污泥的水样注入到经灭菌的含有 高纯氮气的厌氧管中；本文档来自技高网...
【技术保护点】
厌氧反硝化细菌筛选用培养基，其特征在于厌氧反硝化细菌筛选用培养基分液体筛选用培养基和固体筛选用培养基两种；每升液体筛选用培养基是由３．０～５．０ｇ ＫＮＯ↓［３］、３．０～５．０ｇ ＮａＮＯ↓［３］、０．０１～０．０６ｇ ＭｇＳＯ↓［ ４］.７Ｈ↓［２］Ｏ、１．０～３．０ｇ Ｋ↓［２］ＨＰＯ↓［４］、８～１５ｇ酒石酸钾钠、０．５～２ｇ ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］、０．１～２ｇ ＦｅＣｌ↓［２］.６Ｈ↓［２］Ｏ、０．１～２ｇ ＣａＣｌ↓［２］.２Ｈ↓［２］Ｏ、０．３～ ０．８ｇ Ｌ－半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，液体筛选用培养基的ｐＨ值为７．５；每升固体筛选用培养基是由３．０～５．０ｇ ＫＮＯ↓［３］、３．０～５．０ｇ ＮａＮＯ↓［３］、０．０１～０．０６ｇ ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ、１．０ ～３．０ｇ Ｋ↓［２］ＨＰＯ↓［４］、８～１５ｇ酒石酸钾钠、０．５～２ｇ ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］、０．１～２ｇＦｅＣｌ↓［２］.６Ｈ↓［２］Ｏ、０．１～２ｇ ＣａＣｌ↓［２］.２Ｈ↓［２］Ｏ、１０～１５ｇ琼脂粉、０．０５～０．４ｍＬ 浓度为０．２～０．４ｇ／Ｌ的刃天青溶液、０．３～０．８ｇ Ｌ－半胱氨酸和余量的蒸馏水组成，固体筛选用培养基的ｐＨ值为７．５。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：魏利，马放，吕晓磊，孙伟，王博，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]
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