表达载体组织、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途技术

本文报道表达载体，其包含‑抗体轻链表达盒，‑抗体重链表达盒和‑选择标记表达盒，其中该表达盒单向排列，且其中该表达盒按抗体重链表达盒、抗体轻链表达盒和选择标记表达盒的5’至3’顺序排列。本文还报道用于产生生产抗体的细胞的方法，和这些细胞用于重组产生抗体的用途。

Expression of carrier tissue, new production method of production cell and its use in recombinant peptide production

This paper reports the expression vector, which contains light chain antibody expression cassette antibody heavy chain expression cassette and marker expression box, wherein the expression box of one-way permutations, and wherein the expression box according to the antibody heavy chain and light chain antibody expression cassette expression cassette and marker expression cassette 5 'to 3' order. This article also reports on the methods used to produce cells producing antibodies, and the use of these cells for recombinant production of antibodies.

【技术实现步骤摘要】
表达载体组织、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途本申请是申请人于2012年12月19日提交的题为“表达载体组织、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途”的中国专利申请201280062794.3的分案申请。本文报道新的表达载体组织，用于产生生产细胞系的新方法，如新的转染或选择方法，以及这些表达载体和生产细胞系在重组产生目的多肽中的用途。
技术介绍
基因的转录水平可以对其表达水平具有强烈影响，并因此决定了细胞的生产力。它主要受三种载体元件影响：启动子、polyA信号序列和(如果存在)转录终止子。编码抗体重链的核酸通常包含在蛋白质成熟时去除的前导序列(信号序列)(约57bp/19aa)、可变区VH(约350bp/115aa)和恒定区CH(约990bp/330aa)。编码抗体轻链的核酸通常由在蛋白质成熟时去除的前导序列(约66bp/22aa)、可变区VK或VL(约350bp/115aa)和恒定区CK或CL(约321bp/107aa)组成。在真核细胞中重组产生抗体涉及产生表达系统(见McCafferty,J.等,(编辑),AntibodyEngineering,APract本文档来自技高网...

【技术保护点】
表达载体，其包含：‑抗体轻链表达盒，‑抗体重链表达盒，和‑选择标记表达盒，其中该表达盒单向排列，和其中该表达盒按抗体重链表达盒、抗体轻链表达盒和选择标记表达盒的5’至3’顺序排列。

【技术特征摘要】
2011.12.22 EP 11195363.41.表达载体，其包含：-抗体轻链表达盒，-抗体重链表达盒，和-选择标记表达盒，其中该表达盒单向排列，和其中该表达盒按抗体重链表达盒、抗体轻链表达盒和选择标记表达盒的5’至3’顺序排列。2.权利要求1的表达载体，其特征在于所述抗体轻链表达盒和/或所述抗体重链表达盒和/或所述选择标记表达盒相互独立地包含选自人延伸因子1α启动子、人CMV启动子和SV40启动子的启动子。3.权利要求1或2的表达载体，其特征在于一个、两个或全部三个表达盒包含人延伸因子1α启动子。4.权利要求1-3任一项的表达载体，其特征在于所述抗体轻链表达盒和/或所述抗体重链表达盒和/或所述选择标记盒相互独立地包含人延伸因子1α启动子。5.权利要求1-4任一项的表达载体，其特征在于所述表达盒不包含终止子序列。6.权利要求5的表达载体，其特征在于所述终止子序列是人胃泌素基因转录终止子序列(hGT)。7.权利要求1或2的表达载体，其特征在于一个、两个或全部三个表达盒包含人CMV启动子。8.权利要求1、2和7任一项的表达载体，其特征在于所述抗体轻链表达盒和/或所述抗体重链表达盒和/或所述选择标记盒相互独立地包含人CMV启动子。9.权利要求1-4和7-8任一项的表达载体，其特征在于一个、两个或全部三个表达盒包含牛生长激素polyA信号序列。10.权利要求1-4和7-9任一项的表达载体，其特征在于所述抗体轻链表达盒和/或所述抗体重链表达盒和/或所述选择标记盒相互独立地包含牛生长激素polyA信号序列。11.权利要求1-4和7-10任一项的表达载体，其特征在于所述抗体轻链表达盒和/或所述抗体重链表达盒和/或所述选择标记盒相互独立地包含选自牛生长激素polyA信号序列和SV40polyA信号序列的polyA信号序列。12.权利要求1和7-11任一项的表达载体，其特征在于一个、两个或全部三个表达盒在所述polyA信号序列后面包含人胃泌素终止子序列。13.权利要求1和7-12任一项的表达载体，其特征在于所述抗体轻链表达盒和/或所述抗体重链表达盒和/或所述选择标记盒相互独立地在polyA信号序列后面包含人胃泌素终止子序列。14.权利要求1和7-13任一项的表达载体，其特征在于所述抗体轻链表达盒和/或所述抗体重链表达盒和/或所述选择标记盒相互独立地按5’至3’方向包含牛生长激素polyA信号序列和人胃泌素终止子序列。15.权利要求1-14任一项的表达载体，其特征在于一个、两个或全部三个表达盒的启动子包含内含子A。16.权利要求1-8和12-13任一项的表达载体，其特征在于一个、两个或全部三个表达盒包含SV40polyA信号序列。17.权利要求16的表达载体，其特征在于一个、两个或全部三个表达盒包含SV40启动子。18.权利要求1-17任一项的表达载体，其特征在于编码抗体轻链的核酸和/或编码抗体重链的核酸包含至少一个内含子。19.权利要求1-18任一项的表达载体，其特征在于编码抗体轻链的核酸和/或编码抗体重链的核酸是cDNA。20.权利要求1-19任一项的表达载体在重组产生抗体中的用途。21.权利要求1-19任一项的表达载体在产生稳定细胞系中的用途。22.权利要求1-19任一项的表达载体在产生生产细胞系中的用途。23.权利要求1-19任一项的表达载体在产生稳定细胞系中的用途，所述表达载体包含至少一个含有人延伸因子1α启动子的表达盒。24.权利要求1-19任一项的表达载体在产生生产细胞系中的用途，所述表达载体包含至少一个含有人延伸因子1α启动子的表达盒。25.权利要求1-19任一项的表达载体在重组产生抗体中的用途，所述表达载体包含至少一个含有人延伸因子1α启动子的表达盒。26.权利要求1-19任一项的表达载体在产生生产细胞系中的用途，所述表达载体包含至少一个含有人CMV启动子的表达盒。27.权利要求1-19任一项的表达载体在产生稳定细胞系中的用途，所述表达载体包含至少一个含有人CMV启动子的表达盒。28.权利要求1-19任一项的表达载体在产生抗体中的用途，所述表达载体包含至少一个含有人CMV启动子的表达盒。29.用表达载体转染真核细胞的方法，其特征在于转染之前，通过在原核复制起点中切割来线性化表达载体。30.权利要求29的方法，其特征在于原核复制起点在抗体轻链表达盒和抗体重链表达盒之间。31.权利要求29或30的方法，其特征在于所述表达载体是权利要求1-19任一项的表达载体。32.选择包含抗体编码核酸的真核细胞的...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·M·许尔斯曼，H·克内根，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH