一种前列腺癌症早期诊断、转移、复发的综合检测试剂盒及检测方法和应用技术

技术编号:1764618 阅读:209 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种前列腺癌症早期诊断、转移、复发的综合检测试剂盒,包括三组杂交探针、标记物,其中,所述的杂交探针分别具有序列表SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的序列。本发明专利技术还提供了一种PCADM-1基因,PSA基因和RhoGDI2基因原位杂交检测方法,该方法包括以下步骤:a.将所述试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA和DNA接触,形成杂交复合体;b.检测a步骤得到的杂交复合体。本发明专利技术还提供了试剂盒在制备疾病药物中的应用。本发明专利技术优点在于:本发明专利技术提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。本发明专利技术检测方法操作方便、简单,能在区级以上医院普遍使用和推广。

【技术实现步骤摘要】
一种前列腺癌症早期诊断、转移、复发的综合检测试剂盒及检测方法和应用
本专利技术涉及一种试剂盒,具体地说关于一种前列腺癌症早期诊断、转移、 复发的综合检测试剂盒及检测方法和应用。
技术介绍
根据国内外权威机构提供的资料,我国每年癌症的新增人数170万,死亡 人数近160万,患者600万,全球每年新增癌症患者800万,死亡人数接近800 万,患者约有8400万人,到2020年以上人数将翻一番,这是一组可怕的数字。2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家单位做了一个年度 报告,"认为人类在抗癌大战中是失败",也就是说癌症死亡率没有降低,其列 举出造成抗癌大战失败的几个因素是1.肿瘤细胞异质性;2.肿瘤细胞耐药性; 3.抗癌药物设计思路不完善等。同时,该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌 症的措施。本专利技术人在研究中发现,导致癌症死亡率不降的另二个重要原因 是l.不能做到真正的早期诊断;2.转移的病理机制不清楚。依照传统 的医学影像及和其它生化(如蛋白标记物)指标来诊断癌症,认为占 位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些有时无症状体 征),这一概念值得认真讨论。影像医学的2公分以下癌块属早期这 一界定科学性是不够严谨的,从细胞学角度,l公分的肿块约有一亿 个肿瘤细胞,2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞,从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块,其病 理演变过程相当长,可能是一年或两年、甚至三年以上,很难证实的 是在这个过程中,肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上己 证实 一旦形成肿块的同时,其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部 位克隆生长; 一旦切除原发灶后,其他器官复发灶或多发癌块灶先后 形成或转移。因此,在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与 否,不够严谨(有些病例,在发现原发病灶时,同时发现转移病灶, 不在我们表述的内容中),这时己经是晚期了,这是导致癌症死亡率 不降的真正原因。随着分子生物技术日益完善,功能基因组学,癌症基因组学等研 究的深入展开,至今,我们己有可能在基因水平上做更精确的早期诊 断,在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)或突破血管壁早期转移时, 就能做到早期预测诊断。几十年来,PSA在前列腺癌的诊断和治疗中具有划时代的意义。 然而,近些年来越来越多低丰度PSA前列腺癌被诊断,PSA对前列腺 癌诊断的敏感性和特异性越来越受到质疑。Stamey等对1317例前列 腺癌根治患者分析发现,1983-1988年间与1999-2003间相比直肠 指诊阳性率由91%降到17%;患者平均年龄由64岁降至59岁;肿瘤 的体积由5. 3cm降至2. 4cm;平均PSA水平由25ng/ml降至8nh/ml ; 前列腺体积由44g增至53g。研究者认为,1983-1988年间PSA前列 腺癌密切相关,而1999-2003年间PSA仅与前列腺增生(体积)相关。 Bader等报告1493例前列腺癌根治术患者中,有相当部分的前列腺 癌患者PSA水平低(8ng/ml),而且这部分病人与前列腺增生难以鉴别。2004年Stearns ME等采用逆转录聚合酶链反应、DAN蛋白结合 测定法、免疫印迹等方法证实,PCADM-1是前列腺癌相关诊断标记物 1。 PCA匿-1只在前列腺癌组织表达,在BPH、高分级前列腺上皮内瘤 和精囊组织无表达,在其它肿瘤均无表达,而且PCADM-1表达的强度 随着Gleasson评分增加而增强(+1——+5)。采用酶联免疫吸附方法 检测尿液,结果表明,PCADM-1是前列腺癌特异的尿中肿瘤标记物。 他们对533例患者(包括前列腺癌、BPH、有尿路症状患者和正常对 照)尿中PCADM-和血清PSA的比较研究结果表明,尿PCA匿-1检测 敏感性为79%,特异性为83%,而血清PSA检测敏感性〈50%特异性为 55%。RhoGDI2基因是公认的癌症转移抑制基因,在大部分癌症转移患者中均表 达降低。弗吉尼亚大学的泌尿学与分子生理学教授Dan Theodorescu博士领导 的科学小组研究表明,RhoGDI2基因与膀胱癌细胞转移有关系,当RhoGDI2 基因在癌细胞中有活性时,细胞就产生一种能够阻止癌细胞浸入到其他器官的 蛋白,该项研究发表在2006年11月15日期的《癌症研究》(《cancerresearch》) 杂志上。本专利技术人在对大量样本——广泛性腺癌(肝、肺、肾、胃、子宫、卵 巢、乳房、直肠等血液细胞)检测中观察到,癌症病人伴有转移者,RhoGDI2 基因表达量降低或大部分是零表达,该指标有重要的临床价值。我们检测了近 800例各种类型癌症患者(大部分已转移)血液标本,近800例正常对照组人 群,经统计学分析,癌症患者体内RhoGDI2基因表达量为8M左右,正常人群 表达量平均为50%,病例组中有600多例该基因是零表达。同时检测两个家族 性癌症好发家属的直系亲属,该基因的表达量比正常人表达量都低。目前对PCADM-1基因和PSA基因、RhoGDI2基因检测技术大都用于科研方面,特别是临床的个性化的应用在我国现阶段未见报道,根据现有的文献资料PCADM-1基因和PSA基因、RhoGDI2基因的综合检测技术及诊断试剂盒应用前 列腺癌检测未见报道。原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术 结合起来,以标记的核酸分子为探针,在组织细胞原位检测特异性核酸分子的 技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针),在适宜条 件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交,再以放射自显影或免疫 细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分 子。中国专利文献CN1556221公开了"IC53基因及其相关产物诊断和治疗结肠 癌的用途及一种诊断结肠癌的试剂盒"。中国专利文献CN1769485公开了 "栉 孔扇贝病原类立克次氏体的原位杂交检测方法及其试剂盒"。中国专利文 献CN1556410公开了 "一种鱼类病毒的检测试剂盒及其检测方法"。中国专利 文献CN1680597公开了"一种用于定量检测丙型肝炎病毒(HCV)的荧光定量PCR 试剂盒"。中国专利文献CN2918435,公开了 "一种检测肥胖相关基因SNP的寡 核苷酸芯片及试剂盒"。但是,关于前列腺癌症早期诊断、转移、复发的综合 检测试剂盒及检测方法和应用未见报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是,提供一种前列腺癌症早期诊断、转移、复 发的综合检测试剂盒及检测方法和应用。能够检测早期前列腺癌,或者在治疗 后能及早地预测转移复发状况。而且能够检测关于前列腺的其它疾病。为了解决上述问题,本专利技术提供了一种前列腺癌症早期诊断、转移、复发的综合检测试剂盒,包括三组杂交探针、标记物,其中,所述的杂交探针分别具有序列表SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 3所示的序列。(需要 说明的是SEQ ID N0.2序列中第126中碱基可以是g或c或t。第391中碱基 可以是g或c或t。第662中碱基可以是g或c或t。) PCADM-1基因序列见 SEQ ID NO. 2, PCADM-1基因的核苷酸序列长度本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种前列腺癌症早期诊断、转移、复发的综合检测试剂盒,包括三组杂交探针、标记物,其特征在于:所述的杂交探针分别具有序列表SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:裘建英张云福
申请(专利权)人:芮屈生物技术上海有限公司
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]

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