抗松材线虫病黑松体胚再生植株高效繁殖技术制造技术

本发明专利技术公开了一种抗松材线虫病黑松体胚再生植株高效繁殖技术，以抗病黑松未成熟合子胚为外植体，利用诱导培养基、固体增殖培养基、液体增殖培养基、成熟培养基、萌发培养基、体胚苗生长培养基成功建立了一种高效繁殖黑松体胚再生植株的方法且移栽成活，获得再生植株的萌发率77％‑84％，植株转化率82％‑91％，半年的移栽成活率达到85％以上，本发明专利技术针对当前珍贵抗松材线虫病黑松种质资源有限，繁殖相对困难的现状，为快速生产大批高质量苗木，满足林业生产对抗病黑松种苗造林的需求提供一种有效途径。

Efficient propagation techniques of plant regeneration of somatic embryos of Pinus thunbergii pine wood nematode

The invention discloses a pine wood nematode of Pinus thunbergii plantlets, breeding to resistant pine immature zygotic embryos as explants, the induction medium, proliferation medium, solid culture and liquid culture medium, the proliferation of mature germination medium, plantlets growth medium method was established successfully. Efficient breeding of Pinus thunbergii plantlets and transplanting, regenerated plants germination rate of 77% 84%, 82% plant transformation rate in the first half of 91%, the transplant survival rate reached more than 85%, according to the invention the precious pine wood nematode of black pine germplasm resources, breeding status is relatively difficult, for the rapid production of a large number of high quality seedlings, provide an effective way to meet the forestry production needs of Pinus thunbergii seedling disease resistance.

【技术实现步骤摘要】
抗松材线虫病黑松体胚再生植株高效繁殖技术
本专利技术涉及黑松体胚高效繁殖技术，具体涉及一种抗松材线虫病黑松体胚再生植株高效繁殖技术。技术背景松材线虫病(PineWiltDisease)，是由松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)引起的发生在松属树种上的一种毁灭性森林病害，具有易传播、发病快、防治难等特点，被称为松树的癌症。松材线虫病自1982年传入中国以来，给我国松林造成了巨大的损失。我国对该病施行了一系列的防治措施，取得了一定的防治效果，但由于该病发病机制复杂，致病力强，寄主死亡迅速等原因给治愈该病害带来了极大的困难。近年来松材线虫病在我国的扩散趋势越来越明显，现已成为我国一种重要检疫入侵病原生物。黑松(Pinusthunbergii)，属于松科，松属，原产日本及朝鲜半岛东部沿海地区，因其耐海雾，抗海风，抗病虫能力强，可在海滩盐土地方生长，适生于温暖湿润的海洋性气候区域，在我国山东、江苏、安徽、浙江、福建等沿海诸省普遍栽培，是荒山造林，道路行道绿化首选树种。然而黑松是松材线虫病的高度感病树种，我国黑松林的健康发展受到松材线虫病的严重威胁。培育具有抗松材线本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗松材线虫病黑松体胚再生植株高效繁殖技术，其特征在于，包括以下步骤：(1)抗病黑松胚性细胞团诱导：每年6‑7月份采集抗病黑松未成熟球果，采集后将未成熟球果置于4℃预处理6‑8天，预处理结束后将未成熟球果的珠鳞剥离后取出种子，将种子灭菌后在无菌条件下取出未成熟合子胚水平置于诱导培养基上，在25℃条件下暗培养60天，诱导获得胚性细胞团；(2)抗病黑松胚性细胞团维持与增殖：将直径大于3mm的胚性细胞团在无菌条件下转入固体增殖培养基，在25℃条件下暗培养，胚性细胞团在固体增殖培养基上稳定增殖后，将1g/L的胚性细胞团移入液体增殖培养基，在25℃、摇床转速为90r.p.m的条件下进行大量增殖暗培养，得到...

【技术特征摘要】
1.抗松材线虫病黑松体胚再生植株高效繁殖技术，其特征在于，包括以下步骤：(1)抗病黑松胚性细胞团诱导：每年6-7月份采集抗病黑松未成熟球果，采集后将未成熟球果置于4℃预处理6-8天，预处理结束后将未成熟球果的珠鳞剥离后取出种子，将种子灭菌后在无菌条件下取出未成熟合子胚水平置于诱导培养基上，在25℃条件下暗培养60天，诱导获得胚性细胞团；(2)抗病黑松胚性细胞团维持与增殖：将直径大于3mm的胚性细胞团在无菌条件下转入固体增殖培养基，在25℃条件下暗培养，胚性细胞团在固体增殖培养基上稳定增殖后，将1g/L的胚性细胞团移入液体增殖培养基，在25℃、摇床转速为90r.p.m的条件下进行大量增殖暗培养，得到分散型胚性细胞；(3)抗病黑松胚性细胞团成熟培养：将在液体增殖培养基上培养的分散型胚性细胞转移至无菌滤纸上，平铺到成熟培养基上，在25℃的条件下暗培养60天，得到发育完整的成熟体细胞胚；(4)抗病黑松体胚萌发和植株再生：将发育完整的成熟体细胞胚水平放置萌发培养基上，在弱光下生长6-8天，放入完全光照下生长30天，得到萌发的体细胞胚，将萌发的体细胞胚转入体胚苗生长培养基，进行再生植株壮苗，光照培养60天，将根长大于3cm的再生植株进行移栽，半年后成活率为85％～88％。2.如权利要求1所述的抗松材线虫病黑松体胚再生植株高效繁殖技术，其特征在于，所述步骤(1)中诱导培养基的组成为：DCR培养基+2,4...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶建仁，孙婷玉，吴小芹，朱丽华，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32