含有C‑端通用标签的pENTR4 Gateway 中间入门载体及其构建方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种含有C‑端常见蛋白表达标签的Gateway pENTR4中间入门载体及其构建方法。本发明专利技术的载体是在pENTR4的多克隆位点C末端的EcoRV位点插入有蛋白表达标签序列。是通过在pENTR4的多克隆位点C末端的EcoRV位点插入蛋白表达标签序列而构建得到。本发明专利技术构建的含有C‑端常见蛋白表达标签的Gateway pENTR4中间入门载体，能有效地避免N‑端蛋白标签和信号肽相互干扰的潜在应用问题。

PENTR4 Gateway entry vector containing C end general label and its construction method

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to a Gateway pENTR4 intermediate entry vector containing a C end common protein expression label and its construction method. The carrier of the present invention is the insertion of a protein expression label sequence at the EcoRV site of the C terminal of the polyclonal site of pENTR4. It was constructed by inserting a protein expression label sequence at the EcoRV site at the C terminal of the pENTR4 polyclonal site. Gateway pENTR4 middle entry vector constructed by the invention contains C end common protein expression label, can effectively avoid the potential application of N end tag protein signal peptide and mutual interference.

【技术实现步骤摘要】
含有C-端通用标签的pENTR4Gateway中间入门载体及其构建方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种携带C-端常见蛋白表达标签的GatewaypENTR4中间入门载体。
技术介绍
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统，便于功能靶基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统，靶DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移[1]。具体来讲，Gateway技术是基于研究非常清楚的λ嗜菌体位点特异重组系统(attBxattP→attLxattR)(图1)。BP和LR两个反应就构成了Gateway技术，其中BP反应是在噬菌体和细菌的整合因子(INF、Int)的作用下，一个attBDNA片段或表达克隆和一个attP供体载体(pDonor)之间的重组反应，创建一个入门克隆(pENTR)。在构建入门载体后，不再需要使用限制性内切酶和连接酶，可以通过位点特异重组LR反应多次使用，LR反应是在噬菌体编码蛋白Xis和IHF、Int的共同介导下，一个attL入门克隆和一个attR目的载体(pDEST)之间的重组反应，用来在平行的反应中转移靶序列到一个或更多个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有C‑端通用标签的pENTR4Gateway中间入门载体，其特征在于，是在载体pENTR4的多克隆位点C末端的EcoRV位点插入有蛋白表达标签序列。

【技术特征摘要】
1.一种含有C-端通用标签的pENTR4Gateway中间入门载体，其特征在于，是在载体pENTR4的多克隆位点C末端的EcoRV位点插入有蛋白表达标签序列。2.根据权利要求1所述的含有C-端通用标签的pENTR4Gateway中间入门载体，其特征在于，所述的蛋白表达标签是FLAG、V5或HA。3.一种权利要求所述含有C-端通用标签的pENTR4Gateway中间入门载体的构...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建中，陈南华，何姗，李双洁，周荣云，朱美芹，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32