一种基于DNA适配器的基因多态性测定法制造技术

本发明专利技术一种基于ＤＮＡ适配器的基因多态性测定法，属于一种检测ＤＮＡ单核苷酸多态性的方法。具体来说由以下四步组成：（１）用内切酶消化基因组ＤＮＡ，将ＤＮＡ长链切割成含有粘性切口的短片段；（２）设计ＤＮＡ适配器，并将其与上述含有粘性切口的短ＤＮＡ片段连接；（３）采用等位基因特异性引物和一个通用引物进行ＰＣＲ扩增；（４）用电泳或色谱法分离上述经ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片段；（５）根据ＤＮＡ片段的长度判断等位基因的类型或基因的突变类型。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于一种基因多态性测定方法，具体说是一种利用酶切技术、酶联技术和等位基因扩增技术测定基因多态性的方法，可用于检测基因组DNA的多态性和基因突变等。为了解决这一问题，有多种方法，其中常用的方法是先用PCR法预扩增长链DNA，然后将之作为模板再扩增成小的片段。然而这种方法不是一个通用方法，不适用于同时扩增复杂基因组中的不同部分。另一种方法是通过两轮PCR扩增来实现，第一轮是用低浓度的基因特异性引物来扩增，各引物的5′端含有相同的锚定部分，第二轮是采用高浓度的通用型短引物来扩增，该引物与上述基因特异性引物的锚定部分序列相同。然而不管怎样，这种用常规PCR方法进行多重扩增的片段数仍然在10左右，并且需要精心设计引物，不能用于常规检测。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了解决上述问题，提出一种用n+1个引物进行n-重PCR扩增反应的方法，使得n-重PCR扩增的通量及准确性得到进一步提高。本专利技术的技术解决方案一种基于DNA适配器的基因多态性测定法，其特征在于(a)采用限制性内切酶将长的DNA链切割成含有酶切切口的短的DNA片段；(b)在连接酶的存在下用双链部分互补的DNA适配本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于ＤＮＡ适配器的基因多态性测定法，其特征在于：（ａ）采用限制性内切酶将长的ＤＮＡ链切割成含有酶切切口的短的ＤＮＡ片段；（ｂ）在连接酶的存在下用双链部分互补的ＤＮＡ适配器与（ａ）中短的ＤＮＡ片段连接；（ｃ）用一个通用引物和一个等位基因特异性引物对（ｂ）中经与ＤＮＡ适配器连接的ＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增；（ｄ）采用适当的方法检测（ｃ）中经ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片段。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周国华，
申请(专利权)人：周国华，中国人民解放军南京军区联勤部军事医学研究所，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]