PCR方法技术

提供了平衡的增倍ＰＣＲ方法的方法。在该方法中，当在第一和第二个扩增时期当引物的或选物限制地调节第一个引物套的第一个扩增子和第二个引物套的第二个扩增子生成的相对速度时，在单个试管中利用两个或多个成顺序的暂时ＰＣＲ时期有效地分开两个或多个ＰＣＲ反应。同时提供了在手术内诊断和预后中发现特殊用途的快速ＲＴ－ＰＣＲ方法，例如通过确定在岗哨淋巴结中的瘤胚抗原（ＣＥＡ）的表达水平，在诊断恶性食管腺癌中发现的。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
背景本申请公开了一个快速的PCR方法，特别地聚焦于快速的增倍的QRT-PCR方法和相关的组合物和仪器。聚合酶链式反应(PCR)在分子生物学领域是有效的工具。这一技术允许复制/扩增痕量的DNA片段成在有意义的方法中可以分析的量。正如这一技术已经适用于分子生物学应用途径中，如DNA测序，DNA指印等等。另外，这一方法具有检测样品中特定的DNA片段的能力，这些DNA片段的存在可以反映病理状态。所以，这一方法正在分子诊断领域中发现新的应用。另外，随着实时定量PCR(QPCR)的发展，这一技术已经变得更可靠和修改成自动化。目前，这一技术用于检测临床样品的病毒和细菌病原体，检测有白血病历史的患者的癌细胞(和其他癌症如在胸，肺，直肠，食管和皮肤中产生的)。尽管有优点，但分子诊断中的PCR仍然有几个缺点。这经常是一个依赖于操作者的专门技术的。另外，这项技术也非常倾向于会污染。这两个上面提到的因素分别会导致假阴性和假阳性的结果。所以，需要对感兴趣的目标进行内部控制以及将该过程自动化保证操作的封闭的系统中进行(消除污染)。加入控制步骤包括扩增几个不同套的DNA片段以及需要的靶。这些控制步骤提供了关于待分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多重ＰＣＲ反应的方法，包括在ＰＣＲ反应混合物中，在ＤＮＡ样品上进行ＰＣＲ扩增的步骤，潜在ＰＣＲ扩增是在开始的扩增时期和第二个扩增时期进行的，各个扩增时期包括一个或多个ＰＣＲ循环，各个ＰＣＲ循环包括变性步骤，退火步骤和延长步骤，这些步骤可以在与退火步骤相同的温度下进行，其中第二个扩增时期的ＰＣＲ扩增是在与第一个扩增时期不同的反应条件下进行的，可以调节第一个引物套的第一个扩增子和第二个引物套的第二个扩增子在第一个和第二个扩增时期的生产。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：托尼E戈德弗里，詹姆斯D卢克蒂奇，西瓦拉杰，洛瑞A凯利，西德内D芬凯利斯特因，
申请(专利权)人：匹兹堡大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]