一种蕙兰的组培快繁方法技术

本发明专利技术提供一种蕙兰的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。该方法包括花梗芽外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养等步骤。其中，外植体的消毒采用酒精消毒和植物消毒液配合消毒的方式，植物消毒液的有效成分是甘草酸、石榴皮提取物、鱼腥草提取物；各个培养阶段中所使用的培养基中添加了黄秋葵汁和桑叶汁作为营养剂。本发明专利技术的方法对花梗芽外植体的伤害小，且采用本发明专利技术提供的培养基配方可显著提高蕙兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高蕙兰组培苗的质量。

A method of tissue culture and rapid propagation of Cymbidium

The invention provides a cymbidium tissue culture rapid propagation method, which belongs to the technical field of plant tissue culture. The method includes disinfection, pedicel buds explants cultured, subcultured and seedling cultivation steps. Among them, the disinfection of explants with alcohol disinfection and disinfection disinfection liquid with plant, plant active ingredient disinfectant is glycyrrhizic acid, pomegranate extract, Herba Houttuyniae extract; used in each culture medium added okra juice and mulberry juice as a nutritional agent. The method of the invention of the pedicel buds explants damage is small, and the medium can significantly increase the rate of differentiation, proliferation coefficient of explants and the rooting rate of Cymbidium, shorten the culture cycle, improve the quality of Cymbidium plantlets.

【技术实现步骤摘要】
一种蕙兰的组培快繁方法
本专利技术涉及植物组织培养
，具体涉及一种蕙兰的组培快繁方法。
技术介绍
蕙兰为地生草本植物；有着不明显的假鳞茎，叶有5-8枚，呈带形，直立性比较强，长约25-80厘米左右，宽度在7-12毫米，基部常对折呈V形，叶脉比较透亮，边缘常有粗状锯齿；蕙兰是中国栽培最久和最普及的兰花之一，是国家二级重点保护野生物种，是比较耐寒的兰花品种之一。长期以来，蕙兰以分株繁殖为主，分株繁殖速度较慢。想要在短时间内得到更多的植株，可以利用组织培养的方式繁殖。目前，国内外对蕙兰组织培养进行了许多研究，蕙兰组织培养程序一般为：(1)选取种子或茎尖做外植体；(2)诱导形成原球茎；(3)原球茎大量增殖；(4)分化出小植株；(5)生根壮苗；(6)温室移栽。但种子无菌播种法繁殖出的种苗变异较多，种苗生长不一致，而取茎尖作为外植体对母株有一定的伤害。花梗芽作为外植体已经在一些兰花品种上得到了实践，而蕙兰的花梗芽在组培方面还没有得到利用。由于每个兰花品种在习性上有其自身的特点，在对蕙兰花梗芽外植体进行组培时，采用现有的外植体消毒方式、采用普通的培养基进行组培，仍不能取得满意的组培效果，致使繁殖周期长，增值率低，所得组培苗的质量不好。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的在于：针对上述存在的问题，提供一种蕙兰的组培快繁方法，本专利技术的方法以蕙兰的花梗芽作为外植体进行组培繁殖，采用对外植体伤害小的植物消毒液进行消毒，且采用本专利技术提供的培养基进行组培，可显著提高蕙兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高蕙兰组培苗的质量。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1-2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5-10min，用无菌水3-5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.05-0.08份，石榴皮提取物0.8-1.2份，鱼腥草提取物0.5-0.8份，OP-102-4份，水75-100份；(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为45-48天，培养温度18-21℃，光照时间为10-14h/d，光照强度为1500-2000lx；所述诱导培养基为：VW+3-5mg/L2,4-二氯苯氧乙酸+0.2-0.4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6；(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽，自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为1500-2000lx；(4)壮苗培养：继代增殖培养4-6代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即可炼苗，炼苗后得到可以移栽的蕙兰幼苗。较优地，所述继代培养基的组成为：Miller+0.8-1.2mg/L2,4-二氯苯氧乙酸+2-4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.6-5.8。较优地，所述壮苗培养基的组成为：Miller+0.3-0.6mg/L2,4-二氯苯氧乙酸+3-5mg/L6-BA+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+5-8mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6。较优地，所述鱼腥草提取物的提取方法为：将新鲜鱼腥草用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。较优地，所述黄秋葵汁的制备方法是：先洗净表皮然后用打浆机打成浆状，再用纱布过滤，所述滤液即为黄秋葵汁。较优地，所述石榴皮提取物通过以下方法得到：先将石榴皮烘干，制成石榴粉，按照固液比为1g：50-60ml用体积浓度为60-70％的乙醇加热回流提取二次，过滤，减压回收乙醇，减压浓缩得醇提物；加水配制成浓度为9-12mg/ml、pH值为5-6的醇提物溶液，上大孔吸附树脂柱，加水洗涤，然后用体积浓度为40-50％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得流浸膏，真空干燥即得石榴皮提取物。综上所述，由于采用了上述技术方案，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术以蕙兰的花梗芽作为外植体，对其进行消毒时主要采用植物消毒剂进行浸泡，该植物消毒剂是由甘草酸、石榴皮提取物、鱼腥草提取物加乳化剂OP-10和水混合制成的；其中石榴皮提取物和鱼腥草提取物均具有良好的杀菌抗病毒的作用，但两者复合使用时消毒效果和杀菌谱均不能满足外植体消毒的需要，经本申请人反复试验后发现加入少量的甘草酸配合可起到增效作用，能大大增加消毒的效果；采用该植物消毒液可以大大降低外植体的损伤率和降低接种的污染率。(2)本专利技术采用的培养基中添加了黄秋葵汁和桑叶汁作为营养物质，黄秋葵的营养丰富，幼果中含有大量的粘滑汁液，具有特殊的香味；其汁液中混有果胶，牛乳聚糖及阿拉聚糖等；它的果胶为可溶性纤维，在现代保健新观念中极为重视；凡经常食用它有健胃肠，滋补阴阳之功效；据测定每百克嫩果中含蛋白质2.5克、脂肪0.1克、糖类2.7克，纤维素A660国际单位；维生素B1，0.2毫克、维生素B20.06毫克、维生素44毫克、钙81毫克、磷63毫克、铁0.8毫克。桑叶中含有丰富的蛋白质、碳水化合物和无机成分，含有较多的叶酸、较高含量的黄酮化合物和桑苷，丰富的钾、钙、铁和维生素A、B1、B2、B3、C、叶酸以及铜锌等元素，这两种物质的联合添加，与半胱氨酸、生长调节剂、基础培养基一起作用，可以显著提高蕙兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，并提高蕙兰组培苗的质量。(3)本专利技术采用花梗芽作为外植体，所得组培苗生长一致，不会产生变异苗，且能减少因取茎尖外植体引起的母株损失；由于采用科学的消毒方法和研制出专门的培养基，在继代增殖培养过程中，原球茎的增殖可达到8-10倍，组培苗根系健壮，成活率达98％。【具体实施方式】为了更清楚地表达本专利技术，以下通过具体实施例对本专利技术作进一步说明。在本专利技术的实施例中，黄秋葵汁、桑叶汁、鱼腥草提取物和石榴皮提取物的制备方法如下：黄秋葵汁：先洗净表皮然后用打浆机打成浆状，再用纱布过滤，所述滤液即为黄秋葵汁。桑叶汁：先洗净叶片然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为桑叶汁。鱼腥草提取物：将新鲜鱼腥草用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。在本专利技术的一些实施例中，石榴皮提取物通过以下方法得到：先将石榴皮烘干，制成石榴粉，按照固液比为1g：50ml用体积浓度为60％的乙醇加热回流提取二次，过滤，减压回收乙醇，减压浓缩得醇提物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，其特征在于具体步骤为：(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1min‑2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min‑15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5min‑10min，用无菌水3‑5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.05‑0.08份，石榴皮提取物0.8‑1.2份，鱼腥草提取物0.5‑0.8份，OP‑10 2‑4份，水75‑100份；(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为45‑48天，培养温度18‑21℃，光照时间为10‑14h/d，光照强度为1500‑2000lx；所述诱导培养基为：VW+3‑5mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸+0.2‑0.4mg/L激动素+40‑55g/L黄秋葵汁+30‑40g/L桑叶汁+8‑12mg/L半胱氨酸+20‑25g/L蔗糖+6‑8g/L琼脂，pH为5.4‑5.6；(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18‑21℃，光照时间为12‑14h/d，光照强度为1500‑2000lx；(4)壮苗培养：继代增殖培养4‑6代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小芽苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18‑21℃，光照时间为12‑14h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3‑5条，叶片3‑4片，苗高4‑8cm，即可炼苗，炼苗后得到可以移栽的蕙兰幼苗。...

【技术特征摘要】
1.一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，其特征在于具体步骤为：(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1min-2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5min-10min，用无菌水3-5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.05-0.08份，石榴皮提取物0.8-1.2份，鱼腥草提取物0.5-0.8份，OP-102-4份，水75-100份；(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为45-48天，培养温度18-21℃，光照时间为10-14h/d，光照强度为1500-2000lx；所述诱导培养基为：VW+3-5mg/L2,4-二氯苯氧乙酸+0.2-0.4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6；(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为1500-2000lx；(4)壮苗培养：继代增殖培养4-6代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小芽苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3-5条，叶片3-4片...

【专利技术属性】
技术研发人员：张金显，陈财宝，
申请(专利权)人：广西乙木农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45