检测高血压危险因素的方法及其应用技术

本发明专利技术关于一种检测受试者是否存在患高血压的危险因素、对受试者进行针对性抗高血压治疗的方法，本方法包括从受试者体内分离基因组ＤＮＡ、确定包含编码变异α↓［２Ｂ］－肾上腺素受体蛋白的核苷酸序列的ＤＮＡ序列，所述编码变异α↓［２Ｂ］－肾上腺素受体蛋白的核苷酸序列在位于受体多肽第３个胞内环上氨基酸２９４－３１１位１８个氨基酸酸性区段中，第２９８－３０９位１２个谷氨酸的谷氨酸重复单元上缺失至少一个谷氨酸。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种检测或诊断受试者体内是否存在患高血压的危险或是否是患高血压的体质的方法，对受试者进行有针对性的抗高血压治疗的方法，以及选出用于研究要测试的抗高血压剂的受试者的方法。
技术介绍
这里引用出版物和其他资料来描述本专利技术的技术背景，另外，在参考文献中还提供了详细的实施资料。α2肾上腺素受体(α2-ARs)介导许多由儿茶酚胺去甲肾上腺素和肾上腺素引起的生理反应。在人和其他哺乳动物体内，已知的α2肾上腺素受体共有3种基因亚型，分别为α2A-、α2B-及α2C-肾上腺素受体，在人体基因组中，编码这些受体的基因分别位于10号、2号及4号染色体上。由于这些受体的基因中没有内含子，目前还未发现它们存在剪接变体。这些受体亚型的组织分布以及生理和药理功能已有记载，比如Mcdonald等(1997)和Docherty(1998)所描述的。基于最新的基因靶向和转基因小鼠研究，α2肾上腺素受体介导的大多数归因于目前可得到的α2肾上腺素受体激动剂药理作用，包括对神经递质释放的抑制、中枢性低血压和心动过缓作用、镇静和麻醉、以及镇痛。同样的研究显示，α2B-肾上腺素受体在应答激动剂的活化时可介导外周血压升高反应(Link等，1996；Macmillan等，1996)，因此它在高血压的发作中起着重要的作用(Calzada和Artinano，2001)。现在还没有其他的生理或药理作用被确定地与这种受体亚型相关联。α2C肾上腺素受体亚型似乎涉及复杂行为的调节，但现在还不了解这种亚型在中枢神经系统以外的外周组织或心血管调节中是否具有重要功能。与许多其他的常见紊乱疾病一样，高血压由基因和环境因素之间复杂的相互作用引起。可以推测，功能上重要的基因变异在机制上对于调节血管功能是重要的，必将与高血压的发病机理和治疗相关联。最近发现了人α2B-AR基因的一种变异形式(Heinonen等，1999)，该变异等位基因编码一种受体蛋白，其在受体多肽的第3个细胞内环的18个氨基酸的酸性区段(其中15个是谷氨酸)上缺失了3个谷氨酸残基。与α2A-AR和α2C-AR相比，该酸性区段在α2B-AR初级结构中的特征是独特的，表明该基序对于α2B-AR的功能起独特作用。对比不同哺乳动物的α2B-AR多肽的氨基酸序列显示，该酸性区段在哺乳动物α2B-AR中是高度保守的，并且人的该酸性区段比其他物种的长，说明这种基序对于受体的功能有重要影响，而且短的形式(D表示“缺失”)可能代表祖先(ancestral)的形式，长的形式(I表示“插入”)可能代表较近代的等位基因变体。Jewell-Motz和Liggett(1995)利用定点突变技术对该区段的16个氨基酸进行缺失和取代，研究了该区段的体外功能，研究结果表明该酸性结构对于全激动剂促进的受体磷酸化作用和脱敏作用是必需的。基于α2B-AR在小鼠体内的血管收缩特性及该酸性区段在受体脱敏机制中的作用，我们假设缺失变体使受体的脱敏作用降低，因而加强了与高血压相关的全身动脉的血管收缩。为了验证这种假设的正确性，我们对912个中年芬兰男性进行了种群研究。专利技术概述本专利技术的目的是提供一种基于α2B-肾上腺素受体基因的基因型预测受试个体是否存在患高血压的危险的方法，以及一种有针对性进行血压降低治疗的方法。本专利技术进一步的目的是提供一种选择人类受试者的方法，以研究药物的实验性的抗高血压效果。本专利技术涉及一种方法，通过测定编码变异α2B-肾上腺素受体的等位基因的类型，判断一个受试者是否存在患高血压的危险，即测定受试者的人α2B-肾上腺素受体的基因型是否属于缺失/缺失(D/D)型，该方法包括下述步骤a)提供受试者的生物样品；b)提供一种检测方法用来检测生物样品中如下物质的存在1)人α2B-肾上腺素受体插入/插入(I/I)或缺失/插入(D/I)基因型，或2)人α2B-肾上腺素受体缺失/缺失(D/D)基因型，D/D基因型的存在表明受试者有患高血压的增加的危险。在本专利技术中，确定受试者是否属于所述D/D基因型的方法只需一种生物样品如血液样品或口腔刮离样品(buccal sweep)即可。如果在上述样品中存在所述D/D基因型，则表明该受试者患高血压的危险性增加和/或提示受试者需要治疗，如进行α2B选择性或α2B非选择性的α2肾上腺素受体拮抗剂治疗。因此，本专利技术所述的方法可以包括鉴定受试者是否有发展为高血压的增高的危险，和/或受试者是否需要治疗，比如用α2B选择性或α2B非选择性α2肾上腺素受体拮抗剂治疗高血压。本专利技术还涉及一种方法，进一步包括如下步骤c)根据受试者是否属于D/D基因型，评估下述至少一项1)受试者发展为高血压的危险，或2)受试者是否需要α2B选择性或α2B非选择性α2肾上腺素受体拮抗剂进行高血压治疗。本专利技术更进一步的目的是提供一种方法，该方法通过测定编码变异α2B-肾上腺素受体的等位基因类型，即通过测定受试者的人α2B-肾上腺素受体基因型是否属于缺失/缺失(D/D)型，对高血压受试者实施治疗或靶向高血压的治疗，本方法包括前述的步骤，以及对D/D基因型的受试者施用能影响去甲肾上腺素敏感性或交感神经活性的药物。本专利技术还提供了一种试剂盒，用于检测受试者是否存在患高血压的危险，或用于选择合适受试者以进行针对性抗高血压治疗或检验抗高血压试剂的研究，包括测定生物样品中编码变异α2B-肾上腺素受体等位基因类型的用品(means)，还包括其使用方法。本专利技术还提供了一种DNA序列，其包含编码变异α2B-肾上腺素受体蛋白的核苷酸序列，该核苷酸序列编码的受体多肽在受体多肽的第3个胞内环上氨基酸294-311位的18个氨基酸的酸性区段中的第298-309位的12个谷氨酸的重复单元上缺失至少一个谷氨酸。本专利技术还提供了一种变异α2B-肾上腺素受体蛋白，该蛋白在受体多肽第3个胞内环上氨基酸序列第294-311位的18个氨基酸的酸性区段中的第298-309位的12个谷氨酸重复单元上缺失至少1个谷氨酸。专利技术详述本专利技术关于一种编码变异人α2B-肾上腺素受体的DNA分子以及变异的人α2B-肾上腺素受体蛋白，本专利技术还涉及一种评估哺乳动物个体是否存在患高血压危险的方法，以及对高血压进行针对性治疗的方法。应理解，本专利技术所述的“治疗”还包括了“预防”。“在12个谷氨酸的谷氨酸重复单元中缺失至少1个谷氨酸”是指在受体多肽第3个胞内环上氨基酸序列第294-311位的18个氨基酸的酸性区段中的第298-309(SEQ ID NO4)位的12个谷氨酸的重复单元中，缺失1-12个谷氨酸中的任意位置或任意数目的谷氨酸。“人α2B-肾上腺素受体缺失/缺失(D/D)基因型”，简称“D/D基因型”，是指一种个体的基因型，含有两个编码变异α2B-肾上腺素受体的α2B-肾上腺素受体等位基因，该变异α2B-肾上腺素受体在受体多肽第3个胞内环上氨基酸序列第294-311位的18个氨基酸的酸性区段中的第298-309位的12个谷氨酸重复单元上缺失至少1个谷氨酸。相对应的，“缺失/插入(D/I)基因型”是指一种基因型，含有1个编码具有所述缺失的α2B-肾上腺素受体的等位基因，另一等位基因编码没有所述缺失，即有各自插入的α2B-肾上腺素受体。“插入/插入(I/I)基因型”是指一种基因型，其两个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过测定编码变异α↓［２Ｂ］－肾上腺素受体的等位基因的类型，检测受试者体内是否存在患高血压的危险的方法，包含以下步骤：ａ）提供受试者的待测生物样品；ｂ）提供一种检测，来检测生物样品中是否存在：ｉ）人α↓［２Ｂ］－ 肾上腺素受体插入／插入（Ｉ／Ｉ）或缺失／插入（Ｄ／Ｉ）基因型，或ｉｉ）人α↓［２Ｂ］－肾上腺素受体缺失／缺失（Ｄ／Ｄ）基因型，Ｄ／Ｄ基因型的存在表明受试者患高血压的危险性增加。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱卡萨洛南，
申请(专利权)人：OY朱里拉布有限公司，
类型：发明
国别省市：FI[芬兰]