抗替代性轻链抗体制造技术

本发明专利技术关注抗替代性轻链抗体和其用途。确切地说，本发明专利技术关注抗VpreB1抗体和其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗替代性轻链抗体
技术介绍
由B淋巴细胞产生的抗体(Ig)分子由重(H)链和轻(L)链构建。H链和L链氨基端结构域的氨基酸序列是可变的(VH和VL)，尤其在形成抗原组合位点的三个高变区(CDR1、CDR2、CDR3)处是可变的。H链与L链的组装通过L链恒定区(CL)与重链第一恒定(CH1)区之间的二硫键和通过VH与VL域之间的非共价相互作用得到稳定化。在人类和许多动物(如小鼠)中，编码抗体H链和L链的基因通过对编码V区部分的基因片段进行逐步体细胞重排来加以组装。B淋巴细胞发育的各个阶段的特征在于Ig基因基因座的重排状态(参见例如梅尔彻斯(Melchers),F.和罗林克(Rolink),A.,《B淋巴细胞发育和生物学(B-LymphocyteDevelopmentandBiology)》,保罗(Paul),W.E.编,1999,利平科特(Lippincott),费城(Philadelphia))。已经在骨髓中鉴别出B细胞的前驱体(前B细胞)，所述鉴别通过其产生一组称作VpreB(1-3)和λ5的基因代替完全发育的轻链和共表达μ重链来进行。人类VpreB1(CAG30495)的主要同功异型物是145aa长的多肽(SEQIDNO:1)。其具有IgV结构域样结构，但缺乏典型V结构域的最后一个β链(β7)，并且具有与任何其它蛋白质都不展示序列同源性的羧基末端。VpreB2具有若干种同功异型物，包括142个氨基酸的小鼠VpreB2多肽(P13373；SEQIDNO:2)和171个氨基酸长的小鼠VpreB2序列剪接变异体(CAA019641SEQIDNO:3)。VpreB1和VpreB2序列已经公开于EP0269127和美国专利第5,182,205号；柯林斯(Collins)等人,《基因组生物学(GenomeBiol.)》5(10):R84(2004)；和Hollins等人,《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》86(14):5552-5556(1989)。人类VpreB3的主要同功异型物(SEQIDNO:4)是123aa长的蛋白质(CAG30496)，其公开于柯林斯等人,《基因组生物学》5(10):R84(2004)中。VpreB(1-3)与另一种蛋白质λ5非共价缔合。人类λ5是209个氨基酸的多肽(CAA01962；SEQIDNO:7)，其携带与抗体轻链具有强同源性的IgC结构域样结构，并且朝向其氨基末端，携带两个功能上相异的区，其中的一个展示与Vλ结构域β7链的强同源性。人类λ5样蛋白质具有213个氨基酸(NP_064455；SEQIDNO:8)并且展示与抗体λ轻链恒定区的约84％序列一致性。对于其它细节，参见以下综述论文：乌山(Karasuyama)等人,《免疫学进展(Adv.Immunol.)》63:1-41(1996)；梅尔彻斯等人,《今日免疫学(ImmunologyToday)》14:60-68(1993)；和梅尔彻斯,《美国国家科学院院刊》96:2571-2573(1999)。VpreB和λ5多肽一起形成非共价缔合的Ig轻链样结构，其被称作替代性轻链或伪轻链。在早期preB细胞的表面上，替代性轻链以二硫键连接到与膜结合的与信号转导子CD79a/CD79b杂二聚体缔合的Igμ重链以形成B细胞受体样结构，即所谓的前B细胞受体(前BCR)。替代性抗体是基于前B细胞受体(前BCR)，其在抗体谱系的正常发育期间产生。不同于抗体，前BCR是由一个抗体重链与两个替代性轻链组分VpreB和λ5配对组成的三聚体。VpreB和λ5两者都由未经历基因重排并且在V(D)J重组开始之前在早期前B细胞中表达的基因编码。前BCR在结构上与成熟免疫球蛋白的不同之处在于其由一个重链和两个非共价缔合蛋白质(VpreB和λ5)组成，即，与抗体中的两个组分相对，所述前BCR具有三个组分。此外，尽管VpreB与抗体的VλIg结构域同源并且λ5与Cλ结构域同源，其各自具有非标准肽延伸：VpreB1在其C端具有额外21个残基；λ5在其N端具有50个氨基酸延伸。已经利用κ样替代性轻链(κ样SLC)鉴别出κ样B细胞受体(κ样BCR)(弗朗西斯(Frances)等人,《欧洲分子生物学杂志(EMBOJ)》13:5937-43(1994)；汤普森(Thompson)等人,《免疫遗传学(Immunogenetics)》48:305-11(1998)；兰赫尔(Rangel)等人,《生物化学杂志(JBiolChem)》280:17807-14(2005))。兰赫尔等人,《生物化学杂志》280(18):17807-17814(2005)报告作为未经重排Vκ基因产物的Vκ样蛋白质的鉴别和分子表征，其最终与先前由汤普森等人,《免疫遗传学》48:305-311(1998)所报告的cDNA序列一致。然而，弗朗西斯等人,《欧洲分子生物学杂志》13:5937-43(1994)报告具有与B细胞前驱体表面处μ重链缔合的能力的经过重排的生殖系JCk的鉴别和表征，由此提供对用于B细胞发育的λ5路径的替代方案。已经提出κ样和λ样前BCR共同起作用以促进轻链重排并且确保B细胞祖细胞成熟。对于综述，参见麦凯勒(McKeller)和马丁内斯-瓦尔迪兹(Martinez-Valdez)《免疫学研讨会(SeminarsinImmunology)》18:4043(2006)。替代性抗体的设计和生产的其它细节提供于许(Xu)等人,《美国国家科学院院刊》2008,105(31):10756-61中；2008年10月2日出版的PCT公开WO2008/118970中，2008年7月11日提交的美国临时申请第61/134,929号，和许等人,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol)》2010,397,352-360，其全部公开内容都以引用的方式明确并入本文中。已经描述基于丝状噬菌体的组合抗体文库的多样性可以通过打乱重链和轻链基因(康(Kang)等人,《美国国家科学院院刊》,88:11120-11123,(1991))或通过用易错聚合酶链反应(PCR)将无规突变引入到文库中(格拉姆(Gram)等人,《美国国家科学院院刊》,89:3576-3580,(1992))来增加。使用所定义的构架作为产生抗体文库的基础已经由巴巴斯(Barbas)等人,《美国国家科学院院刊》89:4457-4461(1992)(对CD3-H3进行随机化)；巴巴斯等人,《基因(Gene)》137:57-62(2003)(对VκCDR3进行延伸随机化)；和小鸟游(Hayanashi)等人,《生物技术(Biotechniques)》17:310(1994)(通过重叠延伸和PCR同时对抗体CDR区进行突变诱发)描述。其它人报告CDR-H3文库与单一VL基因(尼西姆(Nissim)等人,《欧洲分子生物学杂志》13:692-698(1994))、有限组的VL基因(德·克鲁伊夫(DeKruif)等人,《分子生物学杂志》248:97-105(1995))；或随机的VL基因谱系(格里菲思(Griffiths)等人,《欧洲分子生物学杂志》13:3245-3260(1994))的组合。还参见美国专利第5,667,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合于替代性轻链(SLC)的经过分离的抗体或其抗原结合片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.02 US 62/111,0181.一种特异性结合于替代性轻链(SLC)的经过分离的抗体或其抗原结合片段。2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体特异性结合于所述SLC的VpreB子单元。3.根据权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其中所述VpreB子单元是SEQIDNO:1的人类VpreB1。4.根据权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其中所述VpreB子单元是SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的小鼠VpreB2。5.根据权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其中所述VpreB子单元是SEQIDNO:4的人类VpreB3。6.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体特异性结合于所述SLC的λ5子单元。7.根据权利要求6所述的抗体或抗原结合片段，其中所述λ5子单元是SEQIDNO:7的人类λ5。8.根据权利要求6所述的抗体或抗原结合片段，其中所述λ5子单元是SEQIDNO:9的人类λ5dTail。9.根据权利要求3所述的抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：L霍洛维茨，
申请(专利权)人：i二制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US