本发明专利技术涉及叶用芥菜细胞质雄性不育基因及其克隆方法，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术的叶用芥菜细胞质不育基因具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１所示的序列，长度为６６３碱基对。提取叶用芥菜细胞质雄性不育系基因组ＤＮＡ，以其为模板，设计兼并引物，进行常规链式聚合酶反应，扩增产物克隆到载体上，得到６６３ｂｐ的ＤＮＡ片断。本发明专利技术的叶用芥菜细胞质雄性不育基因在叶用芥菜细胞质雄性不育系回交各世代中可以稳定遗传。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于分子生物学
技术介绍
细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility)是植物中比较普遍的遗传现象，在作物杂种优势利用中有着重要应用价值。由于细胞质雄性不育不能产生正常的功能花粉，因此，利用雄性不育既可以省去人工去雄的手续，又可以保证杂交一代种子的纯度，同时它又是研究花粉发育、细胞质遗传和核质互作的良好的实验系统。十字花科作物存在着明显的杂种优势，目前杂种一代的生产主要是利用自交不亲和性和雄性不育性两种途径。细胞质雄性不育由于其理论上可以获得100％不育度和不育率的材料，因此，在十字花科作物优势育种利用中有着更广阔的前景，十字花科中许多重要的经济作物，如白菜、甘蓝、甘蓝型油菜等都选育出了综合性状良好的雄性不育系。有关细胞质雄性不育机理的研究一直是科学中的热点和难点问题，众多学者认为，细胞质雄性不育性的产生是由于线粒体基因组发生高度重排继而产生新的开放阅读框(openreading frame，orf)，导致线粒体功能发生紊乱，致使小孢子发育过程中能量供应不足(Schnable P等，Trends Plant Sci，1998，3175～180；Budar F等，LifeSci，2001，324543～550；Hanson MR等，Plant Cell，2003，S16154～169)。细胞质雄性不育相关基因的克隆、表达以及功能验证，核质互作调控基因的表达等等是解决细胞质雄性不育的发生机理、花粉发育以及核质互作等生物学相关问题的关键。芥菜是中国的特产蔬菜，属于十字花科植物，在浙江和四川等地有着广泛的栽培，经济价值大，是重要的加工蔬菜，生产上存在病毒病严重和品质下降等问题，而杂种优势的利用可以改良现有芥菜品种的品质及提高抗性。由于芥菜类作物自交亲和指数非常高，生产上很难利用自交不亲和系进行杂种优势的利用。因此，芥菜类作物细胞质雄性不育的应用与理论研究有着重要意义，细胞质雄性不育的机理一直是生物学研究的热点之一。迄今为止，在十字花科作物中，在生产上已经应用的细胞质雄性不育系主要有Ougra型的萝卜细胞质雄性不育系、Brassica nap型甘蓝型油菜细胞质雄性不育系以及Brassica pol型甘蓝型油菜细胞质雄性不育系，在这些类型的细胞质雄性不育系的应用过程中，有关细胞质雄性不育的机理研究一直在进行中，一些不育性相关的基因被克隆，如从Ougra型萝卜细胞质雄性不育系中克隆的orf138基因(Bonhomme F，Mol.Gen.Genet.，1992，235240～248；Krishnasamy CA，Curr.Genet.，1993，24156～163)、Brown GG等在Brassica nap型甘蓝型油菜细胞质雄性不育系克隆的orf222基因(Acata Hort.，1998，459265～274)，以及Singh M等Brassica pol型甘蓝型油菜细胞质雄性不育系克隆的orf224基因(Plant Cell，1991，31349～1362)。到目前为止，尚无叶用芥菜细胞质雄性不育基因的报道，基因库里尚无叶用芥菜细胞质雄性不育基因登录。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。本专利技术的叶用芥菜细胞质雄性不育基因，它具有如下所示的序列。基因序列(1)SEQ ID NO.1的信息(a)序列特征*长度663碱基对*类型核酸*链型双链(b)分子类型DNA(c)假设否(d)反义否(e)最初来源叶用芥菜(Brassica juncea var.multiceps Tsen et Lee)(f)序列描述SEQ ID NO.1atgcctcaac tggataaatt cacttatttt tcacaattct tctggttatg ccttttcttc 60tttactttct atattttcat atgcaatgat ggagatggag tacttgggat cagcagaatt120ctaaaactac gaaaccaact gctttcacac cgggggaaga ccatccagag caaggtcaga180aaaaatcgta gttcagattc aagtcggttg gaggtcttgg cgttcgctat taattatttc240ctctttttcg tgattccaag attatggcca tatatatata ttggatacgg tttgaaattt300ttgttagggt tgaaatatgg aatattccaa aatgaaatct tgactttagg ggtcggacca360gatggcgtcg cgcccccgga tataaacgaa cgggcgccgc tgcatctctt gtacgcggat420gttgagagtt ccgactctca acaagctcga aataatgcga tgctagcgca ccttaatcgc480 atagaatata taacccatga cctagagggt gagcgtgata tcgtgcggcg tcaagcctta540atcgatatca tgaagtggga gattcgaagc ctacagcagc actttcgggt ctttcggcac600ctagaccgtg tgcgagatgc gcagagagcc aggatgaacg agatcctcga tctatttcga660tga 663(2)SEQ ID NO.2的信息(a)序列特征*长度220氨基酸*类型氨基酸*链型单链(b)分子类型肽(c)序列描述Met Pro Gln Leu Asp Lys Phe Thr Tyr Phe Ser Gln Phe Phe Trp Leu1 5 10 15Cys Leu Phe Phe Phe Thr Phe Tyr Ile Phe Ile Cys Asn Asp Gly Asp20 25 30Gly Val Leu Gly Ile Ser Arg Ile Leu Lys Leu Arg Asn Gln Leu Leu35 40 45Ser His Arg Gly Lys Thr Ile Gln Ser Lys Val Arg Lys Asn Arg Ser50 55 60Ser Asp Ser Ser Arg Leu Glu Val Leu Ala Phe Ala Ile Asn Tyr Phe65 70 75 80Leu Phe Phe Val Ile Pro Arg Leu Trp Pro Tyr Ile Tyr Ile Gly Tyr85 90 95Gly Leu Lys Phe Leu Leu Gly Leu Lys Tyr Gly Ile Phe Gln Asn Glu100 105 110Ile Leu Thr Leu Gly Val Gly Pro Asp Gly Val Ala Pro Pro Asp Ile115 120 125Asn Glu Arg Ala Pro Leu His Leu Leu Tyr Ala Asp Val Glu Ser Ser130 135 140Asp Ser Gln本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种叶用芥菜细胞质雄性不育基因，其特征在于，它具有ＳＥＱＩＤＮＯ．１所示的序列： ａｔｇｃｃｔｃａａｃｔｇｇａｔａａａｔｔｃａｃｔｔａｔｔｔｔｔｃａｃａａｔｔｃｔｔｃｔｇｇｔｔａｔｇｃｃｔｔｔｔｃｔｔｃ ６０ｔｔｔａｃｔｔｔｃｔａｔａｔｔｔｔｃａｔａｔｇｃａａｔｇａｔｇｇａｇａｔｇｇａｇｔａｃｔｔｇｇｇａｔ ｃａｇｃａｇａａｔｔ１２０ｃｔａａａａｃｔａｃｇａａａｃｃａａｃｔｇｃｔｔｔｃａｃａ ｃｃｇｇｇｇｇａａｇａｃｃａｔｃｃａｇａｇｃａａｇｇｔｃａｇａ１８０ａａａａａｔｃｇｔａｇｔｔｃａｇａｔｔｃａａｇｔｃｇｇｔｔｇｇａｇｇｔｃｔｔｇｇｃｇｔｔｃｇｃｔａｔｔａａｔｔａｔｔｔｃ２４ ０ｃｔｃｔｔｔｔｔｃｇｔｇａｔｔｃｃａａｇａｔｔａｔｇｇｃｃａｔａｔａｔａｔａｔａｔｔｇｇａｔａｃｇｇｔｔｔｇａａａｔｔｔ３００ｔｔｇｔｔａｇｇｇｔｔｇａａａｔａｔｇｇａａｔａｔｔｃｃａａ ａａｔｇａａａｔｃｔｔｇａｃｔｔｔａｇｇｇｇｔｃｇｇａｃｃａ３６０ｇａｔｇｇｃｇｔｃｇｃｇｃｃｃｃｃｇｇａｔａｔａａａｃｇａａｃｇｇｇｃｇｃｃｇｃｔｇｃａｔｃｔｃｔｔｇｔａｃｇｃｇｇａｔ４２０ ｇｔｔｇａｇａｇｔｔｃｃｇａｃｔｃｔｃａａｃａａｇｃｔｃｇａａａｔａａｔｇｃｇａｔｇｃｔａｇｃｇｃａｃｃｔｔａａｔｃｇｃ４８０ａｔａｇａａｔａｔａｔａａｃｃｃａｔｇａｃｃｔａｇａｇｇｇｔｇａｇ ｃｇｔｇａｔａｔｃｇｔｇｃｇｇｃｇｔｃａａｇｃｃｔｔａ５４０ａｔｃｇａｔａｔｃａｔｇａａｇｔｇｇｇａｇａｔｔｃｇａａｇｃ ｃｔａｃａｇｃａｇｃａｃｔｔｔｃｇｇｇｔｃｔｔｔｃｇｇｃａｃ６００ ｃｔａｇａｃｃｇｔｇｔｇｃｇａｇａｔｇｃｇｃａｇａｇａｇｃｃａｇｇａｔｇａａｃｇａｇａｔｃｃｔｃｇａｔｃｔａｔｔｔｃｇａ６６０ｔｇａ６６３。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张明方，杨景华，陈竹君，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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