一种可检测NF‑κB活化的双荧光素酶报告细胞及其构建方法技术
One can detect NF B activation of the dual luciferase reporter cells and its construction method
The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to a can detect NF B activation of the dual luciferase reporter cells and its construction method. The report is the introduction of the NF cells, kappa B luciferase (Fluc) and the internal Renilla luciferase (RLuc) in HEK293 cells. The construction method includes the stable expression of monoclonal NF cells kappa B FLuc monoclonal cells and stable expression of NF kappa B FLuc/TK RLuc steps. The invention uses highly sensitive NF kappa B luciferase and Renilla luciferase control, were introduced into the HEK293 cells, the cells stably unique screening technology, construction and invention of NF kappa B HEK293 dual luciferase reporter cell so as to improve the stability, and replace the existing NF kappa B reporter cell lines.
【技术实现步骤摘要】
一种可检测NF-κB活化的双荧光素酶报告细胞及其构建方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种能检测NF-κB活化的双荧光素酶报告细胞及其构建方法。
技术介绍
转录因子NF-κB是存在于低等到高等哺乳动物所有细胞非常保守的信号分子，在细胞凋亡、病毒复制、肿瘤发生、炎症和自身免疫病等多种细胞活动中发挥重要作用[1,2]。NF-κB家族由P50(P105的处理产物，两者都被称为NF-κB1)，P52(p100的处理产物，两者都被称为NF-κB2)，REL(也被称为c-REL)，REL-A(也被称为P65)和REL-B组成(图1)。这些蛋白质二聚化后形成有功能的NF-κB。除了REL-B只能与P50或P52有效的结合外，存在所有的同源或异源二聚体组合的可能性，并且这些不同的二聚体都具有NF-κB的活性。每一个NF-κB家族的成员都有一个保守的REL同源区(RHD)，它包含三种类型的基序：结合特异性DNA序列的基序；二聚化的基序；和一个核定位的基序(NLS)。P50型的NF-κB1及P52型的NF-κB2包含仅仅一个RHD，而REL、REL-A、和REL-B除包含一个...
【技术保护点】
一种可检测NF‑κB活化的双荧光素酶报告细胞，其特征在于，是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。
【技术特征摘要】
1.一种可检测NF-κB活化的双荧光素酶报告细胞，其特征在于，是引入了NF-κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。2.一种构建可检测NF-κB活化的双荧光素酶报告细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)稳定表达NF-κBFLuc单克隆细胞：HEK293细胞感染表达NF-κBFLuc的慢病毒，感染后用杀稻瘟菌素筛选，获得稳定表达NF-κBFLucHEK293细胞；上述细胞用有限稀释法进行亚细胞克隆，单个细胞克隆用不同浓度TNF-α刺激，选取具有高水平应答的细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱建中，李双洁，何姗，周荣云，朱美芹，夏芃芃，敖大，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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