具有多种功能的细胞因子制造技术

本发明专利技术涉及一种编码如ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２所示氨基酸序列或其片段的多核苷酸，含有所述多核苷酸的基因工程载体和宿主细胞。同时，本发明专利技术涉及一种如ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２所示的氨基酸序列或其片段的多肽及多肽的生产方法。本发明专利技术还涉及含有所述多核苷酸或其药物可接受的盐，或所述多肽或其药物可接受的盐的药物组合物。本发明专利技术还涉及本发明专利技术的多核苷酸或多肽在制备预防和／或治疗免疫缺陷、艾滋病或造血功能障碍的药物中的应用。本发明专利技术还涉及体外检测来自待测者的样品中本发明专利技术所述的多核苷酸或多肽的表达水平是否变化的方法。本发明专利技术还涉及与本发明专利技术的多肽或其活性片段特异性结合的单克隆或多克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，特别地，本专利技术涉及新颖的细胞因子的多核苷酸及多肽、含有所述多核苷酸的载体或宿主细胞、生产所述多肽的方法、或所述多肽或多核苷酸的应用。
技术介绍
细胞因子为小分子的分泌性多肽类因子，包括白细胞介素、集落刺激因子、干扰素、肿瘤坏死因子、生长因子和趋化因子等。细胞因子通过特异性结合细胞表面受体发挥效应，调节机体的免疫功能，参与免疫细胞的增殖、分化和行使功能。细胞因子除存在于免疫系统外，在机体的各个系统也广泛存在，发挥极为重要的生理调节作用。目前有十余种细胞因子基因工程药物已经被批准上市，治疗肿瘤、感染、造血功能障碍等疾病，另有数十种细胞因子药物在临床实验中，细胞因子抑制剂的新药及临床研究也在近年来获得快速的发展。因而，发现新的细胞因子，进行功能和应用研究是国际的热点领域，具有重要的理论意义和实用价值。趋化因子(chemokine，又称趋化素)，是一类结构相似、分子量8-12kD、具有细胞趋化作用的小分子多肽，它们在机体的免疫防御、免疫调节、炎症反应、造血调节、血管生成等方面具有重要作用。趋化素样因子(chemokine-like factor，CKLF)是由本专利技术人最先克隆成功并命名的细胞因子。功能研究发现，CKLF1具有广谱的趋化活性和增殖刺激活性(参见国际申请PCT/CN00/00026)，而CKLF2是CKLF的全基因产物，编码152个氨基酸。在上述CKLF的基础上，本专利技术人又陆续得到了一些新的细胞因子。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供一种含有本专利技术的多核苷酸的载体。本专利技术的另一目的是提供一种含有本专利技术的载体的宿主细胞。本专利技术的另一目的是提供一种生产本专利技术的多肽的方法。本专利技术的另一目的是提供一种本专利技术的多核苷酸片段。本专利技术的另一目的是提供一种多肽。本专利技术的另一目的是提供一种药物组合物，该药物组合物含有本专利技术的多核苷酸或其药物可接受的盐、载体、宿主细胞、或多肽或其药物可接受的盐，以及一种或一种以上药物可接受的盐或药学上可接受的载体或赋形剂。本专利技术的另一目的是提供本专利技术的多核苷酸或多肽在制备预防和/或治疗免疫缺陷、造血功能障碍或艾滋病的药剂中的应用。本专利技术的另一目的是提供检测待测样品中本专利技术的多核苷酸的表达水平是否变化的方法。本专利技术的另一目的是提供一种单克隆或多克隆抗体，其与本专利技术的多肽或其具有抗原性的片段特异性结合。本专利技术提供一种多核苷酸，该多核苷酸包含(1)编码如SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多核苷酸，或编码如SEQ ID NO2所示的198-248位氨基酸序列的多核苷酸；或(2)与(1)具有至少80％同源性的多核苷酸，该多核苷酸编码的多肽与(1)编码的多肽具有相同的功能。如SEQ ID NO2所述的氨基酸序列为趋化素样因子超家族(chemokine-like factor superfamily)的一个成员，本文定义为CKLFSF2，定位于16q22.1。CKLFSF2的氨基酸序列如SEQID NO2所示，全长248个氨基酸。prosite计算机软件分析，其具有4个跨膜区，分别位于氨基酸残基94-111，116-135，142-116，179-198。SignalP分析表明该蛋白没有明显的信号肽。CKLFSF2在蛋白一级序列上与CKLFSF其它成员的同源性不高，但与多数CKLFSF成员相似，具有潜在的四次跨膜结构和MARVEL结构域，以及小窝蛋白结合结构域(caveolin-binding domain)和AR结合基序(AR-binding motif)，提示它们在功能上具有相关性。本专利技术人利用DNAstar软件对CKLFSF2亲水性和抗原性进行了分析，表明在CKLFSF2两端具有较强的抗原性，因此本专利技术以羧基端51个氨基酸(CKLFSF2 C51，SEQ ID NO2所示的198-248位氨基酸序列)为例研究了CKLFSF2的片段及其功能。本专利技术的多核苷酸序列可以只编码SEQ ID NO2所示的多肽或其片段，也可以在上述多肽或其片段的编码序列的基础上，增加非编码序列，例如内含子、编码序列5′或3′端的非编码序列等。本专利技术的多核苷酸序列最好是以分离形式提供的。本专利技术的多核苷酸是“分离”形式的，其不仅已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开，而且已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来。本专利技术的多核苷酸序列可以是DNA或RNA，其中DNA包括cDNA、基因组DNA以及合成的DNA，DNA可以是双链或是单链形式，单链DNA可以是编码链或是非编码链(反义链)。本专利技术所述的反义链可以为如SEQ ID NO1所示的序列的互补序列。本领域普通技术人员已知，反义链或者其一部分(反义寡核苷酸)可用于抑制细胞内本专利技术CKLFSF2的表达。本专利技术的CKLFSF2的核苷酸序列可以来自任何物种，特别是哺乳动物，包括牛、羊、猪、鼠、马，优选人类。本专利技术还包括与编码CKLFSF2或其片段的多核苷酸具有至少有70％、80％、85％，较好90％，最好95％同源性的多核苷酸序列。特别涉及在严格条件下与CKLFSF2的多核苷酸杂交的多核苷酸，所说的“严格条件”意指发生杂交的前提是序列间至少具备95％的同源性。这样的序列可以是天然存在或人工产生的，可以包括CKLFSF2多核苷酸序列的等位基因变异体、也可以包括CKLFSF2多核苷酸序列中碱基的缺失、插入及置换。这样的序列编码的多肽可以在功能上与本专利技术的CKLFSF2相同、相似、或不同，但最好是编码与CKLFSF2生物学活性基本相同的多肽。因此，本专利技术优选与编码SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多核苷酸序列或其片段具有至少80％同源性的多核苷酸，该多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO2所示的多肽具有相同的功能。本专利技术多核苷酸更优选包含如SEQ ID NO1所示的核苷酸序列的多核苷酸序列或其互补片段，其中如SEQ ID NO1所示的核苷酸序列来源于人睾丸cDNA文库，全长1065个核苷酸，包含编码CKLFSF2蛋白的序列，(例如编码序列(CDS)核苷酸153-899)和5′非编码区(核苷酸1-152)及3′非编码区(核苷酸900-1065)。或者，更优选一种分离的核苷酸序列，其只包含编码CKLFSF2蛋白序列，例如SEQ ID NO1所示的编码序列核苷酸153-899。本专利技术如SEQ ID NO1所示的核苷酸序列在Genbank中的登录号为AF479260。如SEQ ID NO1所示的核苷酸序列的多核苷酸序列的片段也在本专利技术的范围之内，所述片段如SEQ ID NO1的752-904位所示的多核苷酸或其互补序列。所述片段编码的多肽具有与SEQ ID NO1所示的序列编码的多肽相同的功能。本专利技术还提供一种含有编码本专利技术CKLFSF2多肽的多核苷酸或其片段的基因工程载体。所述基因工程载体可以是普通载体、表达载体等。其中普通载体主要用于各种基因组文库和cDNA文库的建立，它们通常含有两个或两个以上的标记基因，其中一个基因用于选择转化体(transformant)，另一基因则是用于检查载体中是否有外源DNA插入。表达载体主要用于研究基因的表达或是用于大量生产一些有用的转录产物或蛋白质，有的也可用于cDNA文库的建立。这类载本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多核苷酸，该多核苷酸包含：（１）编码如ＳＥＱＩＤＮＯ：２所示氨基酸序列的多核苷酸，或编码如ＳＥＱＩＤＮＯ：２所示的１９８－２４８位氨基酸序列的多核苷酸；或（２）与（１）具有至少８０％同源性的多核苷酸，该多核苷酸编码的多肽与（１）编码的多肽具有相同的功能。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩文玲，马大龙，石爽，王应，邱晓彦，刘雅楠，李婷，钟英成，钟吉，张颖妹，宋泉声，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11[]