【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种烟草扭脉病毒检测方法，它包括以下步骤：（１）引物设计根据已报道的烟草扭脉病毒的核苷酸序列（序列号为ＡＪ５７５１２９）设计了扩增烟草扭脉病毒外壳蛋白的特异性引物ＴＶＣＰＦ／ＴＶＣＰＲ，扩增的目的核酸带大小为６２０ｂｐ，引物 序列如下：ＴＶＣＰＦ５′－ＡＴＧＡＡＴＡＣＧＧＧＣＧＧＡＧＣＴＡＧ－３′ＴＶＣＰＲ５′－ＣＴＡＴＴＴＧＧＧＧＴＴＧＴＧＣＡＡＴＴＧＣ－３′（２）总ＲＮＡ提取：①称取烟草叶片５０ｍｇ，放入研钵中，加入１ ｍＬＴｒｉｚｏｌ试剂研磨；研磨液倒入１．５ｍＬ离心管中；②在装有研磨液的离心管中加入４００μＬ氯仿，混匀后静置５ｍｉｎ；③１２，０００ｒｐｍ离心１０ｍｉｎ；④上清液移至一新１．５ｍＬ离心管中，加入等体积的异丙醇， 混匀后静置５ｍｉｎ；⑤１２，０００ｒｐｍ离心１０ｍｉｎ；⑥弃上清，沉淀用１ｍＬ７０％乙醇洗涤，干燥１０ｍｉｎ；⑦沉淀用４０μＬＤＥＰＣ处理水悬浮，－２０℃保存备用；（３）ＲＴ－ＰＣＲ扩增①反转 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李凡，王钰丽，陈海如，孙健，蔡红，吴建宇，秦西云，孔宝华，兰平秀，杨金广，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]
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