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湖泊沉积物中微生物总DNA的提取及生物量的鉴定方法技术

技术编号:1754766 阅读:286 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种湖泊沉积物中微生物总DNA的提取及生物量的鉴定方法,首先抽取部分样品冷冻干燥计算样品含水率;沉积物样品加入提取缓冲液以及SDS裂解,离心、去除腐质酸和多糖,沉淀分离得到单细胞;收集上清液加入高盐和阳离子去污剂消化,提抽;向上述水相中加入萃取剂沉淀,冷乙醇洗涤,临界干燥;最后对粗提液处理,紫外测定OD↓[260nm]/OD↓[280nm]吸光度,定量计算微生物总DNA以及单位沉积物生物量。本发明专利技术直接提取总DNA,整个过程简单、不需要花费贵重的药品,比较经济、实用。本发明专利技术特别适用于湖泊沉积物中微生物总DNA的提取及生物量的鉴定方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种湖泊沉积物中微生物总DNA的提取及生物量的鉴定方法,其特征在于它包括如下步骤:(1)抽取沉积物样品冷冻干燥,并计算样品含水率;(2)配制核酸提取缓冲液,加入十二烷基磺酸钠混匀,将沉积物样品加入混合液中,裂解,离心,去除腐 质酸和多糖,沉淀分离得到单细胞;(3)收集上清液加入高盐和阳离子去污剂十六烷基三甲基溴化铵消化,采用氯仿和异戊醇混合液提抽;(4)向上述步骤水相中加入萃取剂沉淀,并用醇类洗涤,临界干燥;(5)透析带电洗脱纯化回收对粗 提液处理,紫外测定OD↓[260nm]/OD↓[280nm]吸光度,定量计算微生物总DNA以及单位沉积物生物量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:赵兴青肖琳于振洋蒋丽娟尹大强杨柳燕詹忠肖元康
申请(专利权)人:南京大学
类型:发明
国别省市:84[中国|南京]

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