一种提高大豆抗虫性的转基因方法技术

本发明专利技术为一种提高大豆抗虫性的转基因方法，属于大豆转基因育种方法，是将吡喃酮合酶基因ｇ２ｐｓ１利用花粉管通道法转入大豆，对转基因植株苗期进行卡那霉素鉴定，筛选出抗卡那植株，进一步进行ＰＣＲ鉴定及ＲＴ－ＰＣＲ鉴定，并结合室内喂养斜纹夜蛾的抗虫性鉴定，选育出转基因抗虫大豆材料，养虫结果表明两个转基因材料喂养的幼虫重及蛹重与对照喂养的之间都存在显著差异（显著水平Ｐ＞Ｐ０．０５），说明与对照相比，转基因材料能明显抑制斜纹夜蛾的生长发育。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种提高大豆抗虫性的转基因方法，包括：１）应用包含有吡喃酮合酶基因ｇ２ｐｓ１的农杆菌ｐｈｔｔ３７６，利用花粉管通道法转化大豆波高、南农７３－９３５；２）从Ｔ１代开始，对转基因植株苗期进行卡那霉素抗性鉴定，将抗性植株进一步做Ｐ ＣＲ鉴定，ＰＣＲ扩增体系含０．２５ｍＭｄＮＴＰ，ＭｇＣｌ２，１ＵＴａｑ酶，０．５μＭＰｒｉｍｅｒ，１００－２００ｎｇＤＮＡ，总体积２５μｌ，ＰＣＲ扩增反应条件：预变性９５℃５ｍｉｎ，后经９５℃１５ｓ，５２℃５９ｓ ，７２℃２ｍｉｎ，３０个循环，７２℃延伸１０ｍｉｎ，选择ＰＣＲ鉴定结果为阳性的材料；３）Ｔ２代仍然对转基因植株苗期进行卡那霉素抗性鉴定，将卡那抗性植株做ＰＣＲ鉴定，ＰＣＲ扩增体系同上，选择ＰＣＲ鉴定结果为阳性的材料；再以此材料进 一步做ＲＴ－ＰＣＲ鉴定，大豆总ＲＮＡ采用‘天为时代公司植物总ＲＮＡ提取试剂盒’提取，ＰＣＲ扩增体系同上，选择ＲＴ－ＰＣＲ鉴定结果为阳性的材料；４）对Ｔ２代转基因材料进行室内喂养斜纹夜蛾的抗性虫鉴定：于大豆开花期，采摘植株上完全展开叶 ，养虫容器为大号一次性有盖塑料杯，每杯接种１日龄斜纹夜蛾幼虫６头，重复三次，采集转基因植株和对照植株各材料的叶片喂养，２８℃，光照１４ｈ／ｄ，每天更换新鲜叶片两次；喂养至第十天时称每杯幼虫重；同时观察斜纹夜蛾生长状况，第十天时对照植株喂养的斜纹夜蛾长至５龄，而转基因植株喂养的斜纹夜蛾长至４龄，称重后每天记录幼虫化蛹情况，待每杯幼虫完全化蛹后第四天称蛹重；将幼虫重及蛹重两组数据进行方差分析，两个转基因材料波高、南农７３－９３５喂养的幼虫重及蛹重与对照喂养的之间都存在显著差异，显著水平Ｐ＞０．０５，该材料即为获得的通过抗性鉴定的转基因材料。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：喻德跃，张曼，孙海燕，阚贵珍，王慧，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]