昆虫抗性棉花植株及对其进行探测的方法技术

本申请涉及昆虫抗性转基因棉花植株。具体而言，本申请涉及一种特定的事件，其被命名为ＣＯＴ２０２。本申请还涉及以ＣＯＴ２０２事件为特征的多核苷酸、包含所述多核苷酸的植株以及探测ＣＯＴ２０２事件的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及植物基因工程，具体而言，涉及昆虫抗性转基因棉花植株。具体地，本专利技术涉及被命名为COT202的棉花植株，其包含VIP3A基因。其还涉及对来自所述植株的材料进行探测的方法。植物的害虫是全世界重要农业作物损失的主要因素。在美国，由非哺乳类害虫(包括昆虫)导致的植物感染每年造成大约80亿美元的损失。除大田作物的损失之外，有害昆虫对于蔬菜和水果种植者、装饰用花的生产者以及家庭园丁来说也是负担。有害昆虫主要通过高度应用化学杀虫剂来控制，化学杀虫剂通过抑制昆虫生长、阻止昆虫进食或繁殖来发挥活性或致死。对有害昆虫的良好控制由此能够达到，但是这些化学物质有时也会影响到其它有益的昆虫。广泛使用化学杀虫剂的另一个问题在于具有抗性的昆虫变异体的出现。这已被若干种抗性管理实践减轻，但是，对于替代性的害虫控制试剂的需求却仍在增加。生物性的害虫控制试剂，例如，表达杀虫毒素(例如，δ-内毒素)的Bacillus thuringiensis菌株，已被应用于作物植株，并取得了令人满意的结果，提供了化学杀虫剂的替代或补充。编码这些δ-内毒素中的某些的基因已被分离出来，它们在异源宿主中的表达已显示出能提供对具有经济重要性的有害昆虫加以控制的另一种工具。具体而言，在转基因植株中，杀虫毒素，例如Bacillus thuringiensisδ-内毒素的表达已提供了针对选定的有害昆虫的有效保护，表达此类毒素的转基因植株已经商业化，使农民得以减少化学昆虫控制试剂的应用。近来，由Bacillus sp.在生长的营养阶段产生的杀虫蛋白质(营养杀虫蛋白(vegetative insecticidal proteins，VIPs))新家族已被鉴定出来。U.S.专利5,877,012、6,107,279和6,137,033描述了从Bacillus的种分离出来的vip3A毒素基因。VIP3A毒素具有针对广谱鳞翅类昆虫的杀虫活性，其包括但不限于秋天行军虫(fall armyworm)、Spodopterafrugiperda、黑夜盗虫(black cutworm)、Agrotis ipsilon、甘蔗螟虫(sugarcane borer)、Diatraea saccharalis和较少的玉米杆螟虫(cornstalk borer)、Elasmopalpus lignosellus，并且，当表达于转基因植物，例如棉花中时，能向植物提供保护，用于抵抗昆虫进食造成的损害。棉花家族，Gossypium属是Malvaceae的成员，由39个种组成，其中Gossypium hirsutum(陆地棉)是最常见的种植物种。三种其它物种也有种植G.arboreum、G.barbadense和G.herbaceum。这些被种植的物种主要被培养用作种子纤维，其被制为纺织品。棉花适合用作纺织品纤维，因为成熟的干纤维毛以能由其纺成纤细却强劲细丝的方式扭曲。其它产品，例如棉籽油、饼(cake)和棉籽绒是纤维生产的副产品。世界范围内，有害昆虫对于棉花作物的损害每年都会导致显著的的产量损失。对于这些害虫的有效控制以减少产量损失有着经济上的重要性。棉花的有害昆虫的例子包括甜菜夜蛾(Beet armyworm，Spodoptera exigua)、棉铃象甲虫(Boll weevil，Anthonomus grandisgrandis)、甘蓝银纹夜蛾(Cabbage looper，Trichoplusia ni)、云纹盲蝽(Clouded plant bug，Neurocolpus nubilus)、棉蚜虫(Cotton aphid，Aphis gossypii)、棉铃虫(Cotton bollworm，Heliocoverpa zea)、夜盗蛾(Cutworms，Feltia subterranea、Peridroma saucia、Agrotisipsilon)、欧洲玉米螟虫(European corn borer，Ostrinia nubilalis)、秋天行军虫(Spodoptera frugiperda)、秧苗牧草虫(Seedling thrips，Frankliniella spp.)、大豆夜蛾(Soybean looper，Pseudoplusiaincludens)、椿象(Stink bugs，Nezara viridula、Acrosternum hilare、Euschistus servus)、牧草盲蝽(Tarnished plant bug，Lygus lineolaris)、烟草蚜虫(Tobacco budworm，Heliothis virescens)和粉虱(Whiteflies，Trialeurodes abutilonea、Bemisia tabaci)。棉花植株的转化和再生目前已经是建立完善的程序了，典型地基于Agrobacterium tumefaciens(根癌农杆菌)介导的外源DNA转入棉花植株的部分，所述植株部分在组织培养中再生为完全可育的转基因棉花植株。人们需要生产出具有昆虫抗性以使有害昆虫对棉花作物的损害导致的产量损失减少的棉花植株。昆虫抗性棉花植株能够降低对使用化学杀虫剂的需求，化学杀虫剂可能对其它、有益的昆虫以及环境有害。此外，提供包含VIP基因的昆虫抗性植株是人们所希望的，其是包含来自Bacillus thuringiensis的晶体蛋白的转基因植物的替代。这可用于昆虫抗性管理。因此，本专利技术涉及被命名为COT202的昆虫抗性转基因棉花事件。其还涉及探测由此获得的植株材料的方法。“COT202事件”在本申请的上下文中指本文所述的原始的杀虫转基因棉花植株。“杀虫(insecticidal)”在本文中指对昆虫的任何抑制作用，其包括但不限于减少其进食、延缓其生长、降低其生育力、使其麻痹或死亡。“生育力”包含与繁殖相关的任何方面，例如，繁殖能力、繁殖频率以及后代数目。本专利技术还包括从COT202事件获得的任何植株材料，包括种子。COT202事件展示出新颖的基因型，其包含至少一个表达盒。该表达盒包含稳定的启动子，用于在植株中表达，其与编码VIP3A杀虫毒素的基因(用于控制广谱鳞翅类有害昆虫)和合适的聚腺苷酸化信号可操作地连接。合适的启动子可以分离自植物等。大量的植物启动子已被分离和鉴定出来，包括组成型、开关型和/或组织特异性启动子。合适的启动子可选自下述的组，但不限于下述的组CaMV35S、FMV35S、Ubiquitin、Act2、NOS、OCS、Cestrum黄叶卷曲病毒启动子、Patatin、E9、alcA/alcR开关、GST开关、RMS开关、oleosin、Gelvin、核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基、肌动蛋白7、MR7启动子(玉米)、Gos 9(水稻)、GOS2启动子、MasOcs(或超级启动子)、’RolD启动子(Agrobacterium rhizogenes)、SuperMAS启动子以及Suc2启动子(拟南芥)。在本专利技术的一种实施方式中，启动子是Uniquitin启动子、UBQ3，其来自Arabidopsis thaliana。其它元件，例如增强子序列也可被包括进表达盒，以增强基因表达的水平，例如转录或翻译增本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多核苷酸，其包含来自ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１的２６个核苷酸的序列的至少１７个连续的核苷酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：DV尼格罗托，FA肖特科斯基，余文金，
申请(专利权)人：先正达公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]