一种利用SCAR标记进行大白菜品种鉴定和种子纯度检验方法技术

技术编号:1754332 阅读:406 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种利用SCAR标记进行大白菜品种鉴定和种子纯度检验方法,该方法以春大白菜新品种“冠春”及其亲本的基因组DNA为模板,通过RAPD分析,建立了杂交种“冠春”杂交种及其亲本的RAPD特异指纹图谱,成功地获得了一个母本特异性SCAR标记和一个杂种特异性SCAR标记,应用这2个SCAR标记,根据品种指纹图谱和特异标记可以进行“冠春”杂交种的品种鉴定和种子纯度检验。通过134个冠春随机群体的鉴定,鉴定结果与田间鉴定相一致。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用SCAR标记进行大白菜品种鉴定和种子纯度检验方法,其特征在于,该方法以“冠春”父母本及F↓[1]代种子为研究材料进行PCR反应体系优化,筛选特异性引物,进一步对特异片段克隆测序,转化为SCAR标记,并将该SCAR标记用于“冠春”大白菜品种鉴定和种子纯度检验,具体包括以下步骤:1)材料的准备:以春大白菜新品种“冠春”及其亲本种子催芽育苗后移栽至大田,在幼苗期单株编号,随机选取100-200株,于苗期取幼嫩叶片提取DNA备用,成株期根据品种特性鉴定生物学性 状;2)DNA提取:采用CTAB法,其过程为,取0.2g幼嫩叶片,液氮下研磨成粉末;加入750μLCTAB提取液后转入至1.5mL离心管中;然后65℃水浴30min,其间振荡混匀;分别用等体积的Tris-饱和酚、氯仿、异 戊醇混合溶液和等体积的氯仿、异戊醇混合溶液各抽提一次,于常温下在12000r/min条件下离心2次,每次10min;取上清液加入2倍体积预冷的无水乙醇沉淀DNA,于4℃条件下离心15min;离心转速为12000r/min,离心后用70%乙醇清洗沉淀2~3次;加入DNA贮存液,经DNA纯度检测证实纯化度,存于-20℃冰箱中备用;3)SCAR引物设计:母本特异性引物SC134-1200fS134M:TGCTGCAGGTGAAGGCTGGTTCrS1 34M:TGCTGCAGGTTATCCTTTTTGGTTG杂种特异性引物SC266-260fS266-260F:AGGCCCGATGGAGTTTGTGTAAGfS266-260F:AGGCCCGATGATGATAAA TCATTG4)SCAR-PCR扩增:采用25μL的PCR反应体系,其中包括1×缓冲液,2.0mmol/LMgCl↓[2],2.5mmol/LdNTPs,0.3μmol/L引物,1UTaqDNA聚合酶,30~50 ng模板DNA;反应程序:SCAR扩增程序为,94℃预变性4min,94℃变性1min,55℃退火1min,72℃延伸90s,循环30次,最后72℃延伸10min;扩增产物在含5μg/mLEB的1.5%琼脂糖胶,120V下电泳1.0 h,电泳后在紫外灯下观察并照相;5)SCAR标记的特征:A、SC134-1200标记:用SC134-1200的SCAR引物对“...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:张鲁刚王绮张明科惠麦侠张战风
申请(专利权)人:西北农林科技大学
类型:发明
国别省市:87[中国|西安]

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