用HindIII鉴定人乳腺癌BCAR4基因rs13334967多态性的方法技术

本发明专利技术公开了用HindIII鉴定人乳腺癌BCAR4基因rs13334967多态性的方法，包括以下步骤：抽提样品的基因组DNA；提供扩增人乳腺癌BCAR4基因多态性rs13334967位点附近序列的正向引物和反向引物，以所述待测人基因组DNA为模板，进行PCR扩增反应，获取扩增产物；使用限制性内切酶对所述扩增产物进行酶切，获取相应的酶切产物；将酶切产物采用3％的琼脂糖凝胶进行电泳，以判定BCAR4基因多态性rs13334967位点的各基因型。本发明专利技术的方法简单、快速、安全、准确、灵敏度高,值得在临床和研究中推广，并可借鉴用于其它多态性基因的分型。

Identification of rs13334967 polymorphism of human breast cancer BCAR4 gene by HindIII

The invention discloses a method for identification of BCAR4 HindIII in human breast cancer rs13334967 gene polymorphism, which comprises the following steps: genomic DNA was extracted from the samples; provide forward and reverse primers amplification of human breast cancer BCAR4 gene polymorphism rs13334967 loci sequences, using the measured human genomic DNA as template, amplified by PCR. Get the PCR products using restriction enzymes; the PCR products were digested to obtain corresponding digestion products; the digestion products by 3% agarose gel by electrophoresis, with each genotype determination of BCAR4 gene rs13334967 polymorphism. The method of the invention is simple, rapid, safe, accurate and highly sensitive, and is worthy of promotion in clinical and research, and can be used for other polymorphic gene typing.

【技术实现步骤摘要】
用HindIII鉴定人乳腺癌BCAR4基因rs13334967多态性的方法
本专利技术属于生物
，涉及一种用HindIII鉴定人乳腺癌BCAR4基因rs13334967多态性的方法。
技术介绍
单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)，主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性,包括碱基的置换/插入和缺失等形式。SNP是人类可遗传的变异中最常见的一种,现已广泛用于简单和复杂疾病的遗传连锁分析/关联分析及疾病易感基因的定位,指导易感基因克隆.较常见的单碱基多态性位点的检测方法包括聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP),三引物等位基因扩增法(TP-PCR)和测序等方法。这些方法虽各有优点,但也各有其不足之处。PCR-RFLP是一种快速,简便,准确的检测SNP基因型的经典方法。其原理是:限制性内切酶是一类识别DNA特异位点(通常4-6bp),并在特异位点进行切割的酶类。酶切位点的特异性意味着对特定等位基因的完全消化会产生同样的片段序列。而碱基的置换，插入和缺失可以产生或消除一个特定酶切位点，从而改变本文档来自技高网...

【技术保护点】
用HindIII鉴定人乳腺癌BCAR4基因rs13334967多态性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)抽提样品的基因组DNA；(b)提供扩增人乳腺癌BCAR4基因多态性rs13334967位点附近序列的正向引物和反向引物，以所述待测人基因组DNA为模板，进行PCR扩增反应，获取扩增产物；(c)使用限制性内切酶对所述扩增产物进行酶切，获取相应的酶切产物；(d)将酶切产物采用3％的琼脂糖凝胶进行电泳，以判定BCAR4基因多态性rs13334967位点的各基因型。

【技术特征摘要】
1.用HindIII鉴定人乳腺癌BCAR4基因rs13334967多态性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)抽提样品的基因组DNA；(b)提供扩增人乳腺癌BCAR4基因多态性rs13334967位点附近序列的正向引物和反向引物，以所述待测人基因组DNA为模板，进行PCR扩增反应，获取扩增产物；(c)使用限制性内切酶对所述扩增产物进行酶切，获取相应的酶切产物；(d)将酶切产物采用3％的琼脂糖凝胶进行电泳，以判定BCAR4基因多态性rs13334967位点的各基因型。2.根据权利要求1所述的用HindIII鉴定人乳腺癌BCAR4基因rs13334967多态性的方法，其特征在于，步骤(b)中所述正向引物和反向引物的设计与合成具体为：碱基序列信息从NCBI的dbSNP数据库获取，在CHIP网站上进行核对，确定BCAR4多态位点碱基变异数据；含BCAR4rs13334967的部分基因序列如SEQ:ID:NO:1所示；基因序列的第507个碱基R代表了A/G多态，即为rs8012083的多态性位点；基因序列的第501个碱基W代表了A/T多态，即为rs13334967的多态性位点；根据rs13334967的具体序列和多态性碱基的位置采用PrimerPremier6.0设计出的上下游引物，正向引物序列如SEQ:ID:NO:2所示；反向引物序列如SEQ:ID:NO:3所示，其中正向引物序列中倒数第2位碱基为A，因此错配后PCR产物中多态附近序列由ATGCTA或ATGCTT更改为AAGCTA或AAGCTT；因此扩增产物中T等位基因片段能被识别A^AGCTT序列的限制性内切酶HindⅢ识别，进而，根据片段切开情况来判断多态基因型；按照正向引物序列和反向引物序列合成引物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鹏，徐莉娟，蔡雨欣，李沂娴，杨冉鑫，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南,41