一种深海海参来源的耐低温超氧化物歧化酶MnSOD及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种深海海参来源的耐低温超氧化物歧化酶MnSOD及其制备方法，该方法使用冷休克表达载体pColdⅡ构建原核表达重组质粒，并导入到含有伴侣质粒的大肠杆菌Chaperone Competent Cell pG‑KJE8/BL21中进行重组蛋白表达。通过该方法，重组蛋白能够在上清中大量表达，易于后期纯化，能够快速获得产量高、纯度高、活力好的MnSOD。本发明专利技术的表达产物具有耐低温、稳定性好的特性，可大规模应用于生物、食品、医药、美容、农业、工业等领域，节约成本。

A cryogenic superoxide dismutase MnSOD from the source of deep sea sea cucumber and its preparation method

The invention discloses a deep sea cucumber from low temperature resistant superoxide dismutase MnSOD and its preparation method, the method of using cold shock expression vector of pCold to construct prokaryotic expression recombinant plasmid into E.coli Chaperone with partner Competent Cell pG KJE8/BL21 for recombinant protein expression. Through this method, the recombinant protein can be expressed in a large amount in the supernatant, easy to be purified later, and can quickly obtain MnSOD with high yield, high purity and good vitality. The expression product of the invention has the characteristics of low temperature resistance and good stability, and can be applied to fields such as biology, food, medicine, beauty, agriculture and industry in a large scale, so as to save cost.

【技术实现步骤摘要】
一种深海海参来源的耐低温超氧化物歧化酶MnSOD及其制备方法
本专利技术属于基因工程
，特别涉及一种深海海参来源的耐低温超氧化物歧化酶MnSOD及其制备方法。
技术介绍
超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase)简称SOD，是一种广泛存在于自然界的生物酶，按所含金属种类不同主要可分为铜锌SOD、锰SOD和铁SOD三种。锰SOD主要存在于真核细胞的线粒体和原核细胞中，在植物的叶绿体基质和类囊体膜上也有存在，纯品呈粉红色，由4条或2条肽链组成。由于锰SOD定位于线粒体，因此被认为是抵御氧化压力的第一线。许多研究表明，氧自由基在肿瘤的发生发展过程中起重要作用，而锰SOD是最有效的具有抗肿瘤活性的抗氧化酶之一(曾跃平,刘洁,王宝玺.锰超氧化物歧化酶与肿瘤关系研究进展[J].癌症进展,2009,7(6):613-616.)。另外，锰超氧化物歧化酶还具有抗衰老、抗辐射、抗炎症，抑制肿瘤和癌症等重要的功能。临床研究表明，其对炎症、缺血再灌注损伤、辐射损伤均有一定疗效，还可减少抗癌药物对细胞和心脏的毒副作用(王峰,杨文杰,成子锋,等.人锰超氧化物歧化酶的扩增和表达研究[J].药物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种深海海参来源的耐低温超氧化物歧化酶MnSOD的编码蛋白，其特征在于，其具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有相似或者同等功能的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种深海海参来源的耐低温超氧化物歧化酶MnSOD的编码蛋白，其特征在于，其具有SEQIDNO.2所示的氨基酸序列或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有相似或者同等功能的氨基酸序列。2.编码权利要求1所述蛋白的基因，记做PaMnSOD。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其具有SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。4.含有权利要求2或3所述基因的pColdⅡ载体。5.含有权利要求4所述载体的ChaperoneCompetentCellpG-KJE8/BL21表达宿主细胞。6.一种深海海参来源的耐低温超氧化物歧化酶MnSOD的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1、Paelopatidessp.总RNA及cDNA的获得；步骤2、Paelopatidessp.超氧化物歧化酶PaMnSOD基因的获得和序列分析；步骤3、Paelopatidessp.超氧化物歧化酶PaMnSOD基因的可溶性表达与纯化。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的Paelopatidessp.超氧化物歧化酶PaMnSOD基因的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚男，张海滨，孔雪，刘君，刘合露，
申请(专利权)人：中国科学院深海科学与工程研究所，
类型：发明
国别省市：海南,46