一株具有绿色荧光标记的PRRSV XH‑GD毒株及其构建方法技术

本发明专利技术公开一株具有绿色荧光标记的PRRSV XH‑GD毒株及其构建方法。该毒株是经TRS6改造的绿色荧光标记EGFP基因插入至PRRSV XH‑GD基因组ORF1b和ORF2a非结构蛋白之间。在MARC‑145细胞上的研究表明，拯救的病毒EGFP‑XH‑GD与亲本XH‑GD毒株在生长动力学曲线，病毒滴度和噬斑实验等生物学特性上较为一致，且荧光蛋白的表达保持着高效率和稳定的荧光密度和荧光强度。病毒的可视化，在荧光显微镜下可以直观的观察其感染过程，且具有什么生物学特性，在且抗病毒药物和PRRSV示踪具有直观，便捷、节省抗体成本，具有很好的应用推广前景。

A strain of green fluorescence labeled PRRSV XH GD strain and its construction method

The invention discloses a plant with green fluorescent labeled PRRSV XH GD strain and its construction method. The virus is a green fluorescent marker of EGFP gene by TRS6 transformation into PRRSV XH GD genomic ORF1b and ORF2a non structural protein. Study on MARC 145 cells showed that the rescued virus EGFP XH GD and parent XH GD strains on the growth kinetics curves, consistent biological characteristics of virus titer and plaque experiment, and the fluorescent protein expression maintains high efficiency and stable fluorescence intensity and fluorescence intensity. The visualization of virus can directly observe its infection process under fluorescent microscope, and has any biological characteristics. In addition, antiviral drugs and PRRSV tracers are intuitive, convenient, and save the cost of antibodies, so it has a good application and popularization prospect.

【技术实现步骤摘要】
一株具有绿色荧光标记的PRRSVXH-GD毒株及其构建方法
本专利技术涉及一种蓝耳病毒，特别涉及一株具有绿色荧光标记的PRRSVXH-GD毒株及其构建方法。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)的病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)临床主要引起母猪流产、死胎或木乃伊胎，育肥猪和仔猪的呼吸障碍的传染病。直至今日，PRRS仍在全球大部分地区流行，为严重危害养猪业的主要传染病之一。为抗病毒药物筛选验证，减少相关抗体的使用和操作的工作量，直观且实时的观测病毒在不同药物环境下增值情况。更方便地为研究PRRSV的致病分子机制和为设计基因标记疫苗提供基础。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的目的在于提供一株具有绿色荧光标记的PRRSVXH-GD毒株。本专利技术的目的在荧光显微镜下可以直观的观察其感染过程，且具有什么生物学特性，在且抗病毒药物和PRRSV示踪具有直观，便捷、节省抗体成本荧光蛋白EG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株具有绿色荧光标记的PRRSV XH‑GD毒株，其特征在于是将经TRS6改造的绿色荧光标记EGFP基因插入至PRRSV XH‑GD基因组ORF1b和ORF2a非结构蛋白之间。

【技术特征摘要】
1.一株具有绿色荧光标记的PRRSVXH-GD毒株，其特征在于是将经TRS6改造的绿色荧光标记EGFP基因插入至PRRSVXH-GD基因组ORF1b和ORF2a非结构蛋白之间。2.根据权利要求1所述的具有绿色荧光标记的PRRSVXH-GD毒株，其特征在于：所述的TRS6的序列如SEQIDNO：1所示。3.根据权利要求1所述的具有绿色荧光标记的PRRSVXH-GD毒株，其特征在于：所述的EGFP基因的序列如SEQIDNO：2所示。4.权利要求1～3任一项所述的具有绿色荧光标记的PRRSVXH-GD毒株的构建方法，其特征在于包括如下步骤：(1)提取PRRSVXH-GD毒株RNA，并反转录，得到cDNA，备用；(2)引物序列设计如下：EGFP-TRS6-1-2-F：5'-GGACGAGCTGTACAAGTAAGTTCCGTGGCAACCCCTTTAACCAGAG-3'；TRS6-2-ORF2-F：5'-CTTTAACCAGAGTTTCAGCGGAACAATGAAATGGGGTCCATGCAA-3'；14-11F：5'-GGTGCTGGAAAGTGATGTTGG-3'；14-11R：5'-AAAGCGGGCATACCGTGTAAT-3'；TRS2-EGFP-F：5'-TTGAACCAACTTTAGGCCTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：张桂红，朱棣华，孙彦阔，汪志，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44