一种稳定表达猪源NOD2受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞及构建方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及稳定表达猪源NOD2受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。该细胞系是指转入了猪源NOD2受体基因的HEK293‑NF‑κB细胞，所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。本发明专利技术提供能够用于研究pNOD2活化激活下游NF‑κB启动子报告基因检测稳定细胞系。本发明专利技术也为RNA‑Seq技术高通量筛选pNOD2静默和活化状态下稳定细胞内差异表达基因提供了生物材料，并为进一步研究NOD2的种属特异性奠定了基础和平台。

A porcine NOD2 receptor gene NF kappa B stable expression of dual luciferase reporter cells and construction method

【技术实现步骤摘要】
一种稳定表达猪源NOD2受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞及构建方法
本专利技术属于生物
具体涉及稳定表达猪源NOD2(pNOD2)受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。更具体地说，本专利技术提供能够用于研究pNOD2活化激活下游NF-κB启动子报告基因检测稳定细胞系。本专利技术也为RNA-Seq技术高通量筛选pNOD2静默和活化状态下稳定细胞内差异表达基因提供了生物材料，并为进一步研究NOD2的种属特异性奠定了基础和平台。
技术介绍
NOD样受体(NLR)NLRC2(NOD2)，NLR是位于细胞胞浆内的受体家族。人有22个成员，而鼠有34个成员。所有成员具有相似的结构域：N端的活性区域(effectordomain)，中间的核苷酸结合和聚合区(nucleotide-bindingandoligomerizationdomain,NOD)和C端的LRR(Leucinerichrepeats)基序。根据N端活性区的不同，分成五个亚类：NLRA(Acidactivationdomain),NLRB(Baculovirusinhibitorofapoptosis本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定表达猪源NOD2受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系，其特征在于，是指转入了猪源NOD2受体基因pNOD2的HEK293‑NF‑κB细胞，所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。

【技术特征摘要】
1.一种稳定表达猪源NOD2受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系，其特征在于，是指转入了猪源NOD2受体基因pNOD2的HEK293-NF-κB细胞，所述HEK293-NF-κB细胞是引入了NF-κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。2.一种稳定表达猪源NOD2受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系的构建方法，其特征在于包括以下步骤：(1)含pNOD2基因编码区的pcDNA真核表达载体的构建设计PCR引物，从猪PK15细胞RNA中RT-PCR扩增pNOD2基因编码区，扩增PCR片段经双酶切后和带有C-端HA表达标签的GatewaypENTR4中间入门载体连接；得到的将含有pNOD2的pENTR4重组质粒和目的pcDNA表达载体pDEST47进行位点特异重组反应，经菌落PCR鉴定获得重组pcDNApNOD2克隆；(2)HEK293-NF-κB双荧光素酶稳定报告细胞的构建：培养人胚肾细胞HEK293至融合度70％-80％，利用表达NF-κB虫荧光素FLuc的慢病毒感染HEK293细胞，感染细胞用10μg/ml杀...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建中，朱美芹，何姗，周荣云，李双洁，陈南华，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32