一种稳定表达猪源TLR3的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及稳定表达猪源TLR3受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。该细胞系是指转入了猪源TLR3受体基因的HEK293‑NF‑κB细胞，所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。本发明专利技术提供能够用于研究pTLR3活化激活下游NF‑κB启动子报告基因检测稳定细胞系。本发明专利技术也为RNA‑Seq技术高通量筛选pTLR3静默和活化状态下稳定细胞内差异表达基因提供了生物材料，并为进一步研究TLR3的种属特异性奠定了基础和平台。

A stable expression of porcine TLR3 NF kappa B dual luciferase reporter cell line and its construction method

【技术实现步骤摘要】
一种稳定表达猪源TLR3的NF-κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法
本专利技术属于生物
具体涉及稳定表达猪源TLR3(pTLR3)受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。更具体地说，本专利技术提供能够用于研究pTLR3活化激活下游NF-κB启动子报告基因检测稳定细胞系。本专利技术也为RNA-Seq技术高通量筛选pTLR3静默和活化状态下稳定细胞内差异表达基因提供了生物材料，并为进一步研究TLR3的种属特异性奠定了基础和平台。
技术介绍
Toll样受体3型(TLR3)，广泛分布于除嗜中性粒细胞和浆细胞样树突细胞(pDC)外的所有天然免疫细胞，并定位于这些细胞内体。TLR3在内质网(ER)合成，并通过跨膜蛋白UNC93B1转运到细胞内体[1]。TLR3识别病毒的双链RNA(dsRNA)和dsRNA的人工合成类似物聚肌苷酸-聚胞苷酸(polyI:C)[2]。TLR3胞外区(ECD)蛋白晶体结构在TLR蛋白家族中最早被解析出来，ECD呈马蹄状三维空间结构并以单体形式存在。一旦结合dsRNA后，ECD形成二聚体结构；dsRNA链上的糖和磷酸骨架与TLR3ECD的N-端和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定表达猪源TLR3受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系，其特征在于，是指转入了猪源TLR3受体基因pTLR3的HEK293‑NF‑κB细胞，所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。

【技术特征摘要】
1.一种稳定表达猪源TLR3受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系，其特征在于，是指转入了猪源TLR3受体基因pTLR3的HEK293-NF-κB细胞，所述HEK293-NF-κB细胞是引入了NF-κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。2.一种稳定表达猪源TLR3受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系的构建方法，其特征在于包括以下步骤：(1)含pTLR3基因编码区的pcDNA真核表达载体的构建设计PCR引物，从猪肺泡巨噬细胞PAM的RNA中RT-PCR扩增pTLR3编码区基因，扩增PCR片段经双酶切后和带有C-端HA表达标签的GatewaypENTR4中间入门载体连接；将得到的含pTLR3的pENTR4重组质粒和目的pcDNA表达载体pDEST47进行位点特异LR重组反应，获得重组pcDNApTLR3表达克隆；(2)HEK293-NF-κB双荧光素酶稳定报告细胞的构建：培养人胚肾细胞HEK293至融合度70％-80％，利用表达NF-κB虫荧光素FLuc的慢病毒感染HEK293细胞，感染细胞用10μg/ml杀...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建中，何姗，朱聪，李双洁，陈南华，周荣云，朱美芹，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32