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一株稳定表达人源TLR8受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法技术

技术编号:17538030 阅读:97 留言:0更新日期:2018-03-24 11:51
本发明专利技术属于生物技术领域,具体涉及稳定表达人源TLR8受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。该细胞系是指转入了人源TLR8基因的HEK293‑NF‑κB细胞,所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。本发明专利技术也为研究TLR8配体在肿瘤治疗中的作用,以及利用RNA‑Seq技术高通量筛选hTLR8静默和活化状态下稳定细胞内差异表达基因提供了生物材料,并为进一步研究TLR8的种属特异性奠定了基础和平台。

【技术实现步骤摘要】
一株稳定表达人源TLR8受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法
本专利技术属于生物
具体涉及稳定表达人源TLR8(hTLR8)受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。更具体地说,本专利技术提供能够用于研究hTLR8活化激活下游NF-κB启动子报告基因检测稳定细胞系。本专利技术也为研究TLR8配体在肿瘤治疗中的作用,以及利用RNA-Seq技术高通量筛选hTLR8静默和活化状态下稳定细胞内差异表达基因提供了生物材料,并为进一步研究TLR8的种属特异性奠定了基础和平台。
技术介绍
作为模式识别受体(Patternrecognitionreceptors,PRR)的重要组成,Toll样受体(Toll-likereceptors,TLR)在对抗入侵病原体的过程中起到了至关重要的作用,能够有效激活天然免疫和获得性免疫应答。TLR受体分子通过其胞浆区(Cytoplasmicdomain,CP)的TIR结构域聚合,招募具有同源结构域的接头分子MyD88,活化下游连接分子TRAF6和IKK、MEKK3等激酶,分别诱导细胞通过NF-κB途径产生促炎细胞因子和IRF途径本文档来自技高网...
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【技术保护点】
一种稳定表达人源TLR8受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系,其特征在于,是指转入了人源TLR8受体基因hTLR8的HEK293‑NF‑κB细胞,所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。

【技术特征摘要】
1.一种稳定表达人源TLR8受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系,其特征在于,是指转入了人源TLR8受体基因hTLR8的HEK293-NF-κB细胞,所述HEK293-NF-κB细胞是引入了NF-κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。2.一种稳定表达人源TLR8受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系的构建方法,其特征在于包括以下步骤:(1)含hTLR8基因的pcDNA3.1(-)真核表达载体的构建:以人肠系膜淋巴结中提取总RNA反转录获得的cDNA为模板,利用特异性引物扩增hTLR8全长编码区基因,PCR产物纯化后利用NheI和EcoRV酶切,与同样酶切并带C-端HA标签的pcDNA3.1(-)连接后,获得含hTLR8基因的pcDNA3.1(-)真核表达载体;(2)HEK293-NF-κB双荧光素酶稳定报告细胞的构建:培养人胚肾细胞HEK293至融合度70%-80%,利用表达NF-κB虫荧光素FLuc的慢病毒感染HEK293细胞,感染细胞用10μg/ml杀稻瘟菌素筛选获得稳定表达NF-κ...

【专利技术属性】
技术研发人员:朱建中夏芃芃李双洁敖大陈南华
申请(专利权)人:扬州大学
类型:发明
国别省市:江苏,32

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