The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to stable expression of porcine RIG I receptor gene NF kappa B dual luciferase reporter cell line and its construction method. This cell line refers to into the porcine RIG I (pRIG I) receptor gene HEK293 NF K B cells, the HEK293 NF kappa B cell is the introduction of the NF kappa B luciferase and Renilla luciferase control HEK293 cells. The present invention provides can be used to study the pRIG I activation downstream NF kappa B promoter reporter gene detection of stable cell lines. The invention also RNA Seq technology for high-throughput screening of pRIG I silent and stable expression of genes in cells between the activation state provides biological materials, and laid the foundation for the further research of RIG platform and I species specificity.
【技术实现步骤摘要】
一种稳定表达猪源RIG-I受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞及其构建方法
本专利技术属于生物
具体涉及稳定表达猪源RIG-I(pRIG-I)受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。更具体地说,本专利技术提供能够用于研究pRIG-I活化激活下游NF-κB启动子报告基因检测稳定细胞系。本专利技术也为RNA-Seq技术高通量筛选pRIG-I静默和活化状态下稳定细胞内差异表达基因提供了生物材料,并为进一步研究RIG-I的种属特异性奠定了基础和平台。
技术介绍
RIG样受体(RLR)RIG-IRLR是细胞胞浆内的主要病毒RNA受体。RIG-I最早通过筛选cDNA文库时被发现[1,2],其它成员还包括MDA5和LGP2。RIG-I和MDA5有相似的结构区域:N端的两个CARD(caspaserecruitmentdomains)串联结构域(2CARDs),具有信号活性,中间的DExH-box解旋酶区域(helicasedomain)和C端的抑制区或调控区(repressordomain或regulatorydomainRD)[3]。RIG-I最佳识别 ...
【技术保护点】
一种稳定表达猪源RIG‑I受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系,其特征在于,是指转入了猪源RIG‑I受体基因的HEK293‑NF‑κB细胞,所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。
【技术特征摘要】
1.一种稳定表达猪源RIG-I受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系,其特征在于,是指转入了猪源RIG-I受体基因的HEK293-NF-κB细胞,所述HEK293-NF-κB细胞是引入了NF-κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。2.一种稳定表达猪源RIG-I(pRIG-I)受体基因的NF-κB双荧光素酶报告细胞系的构建方法,其特征在于包括以下步骤:(1)含pRIG-I编码基因的pcDNA真核表达载体的构建设计PCR引物,从猪PK15细胞RNA中RT-PCR扩增pRIG-I编码基因,扩增PCR片段经双酶切后和带有C-端HA表达标签的GatewaypENTR4中间入门载体进行连接;将提到的含pRIG-I的pENTR4重组质粒和目的pcDNA表达载体pDEST47进行LR位点特异重组反应,获得重组pcDNApRIG-I表达质粒;(2)HEK293-NF-κB双荧光素酶稳定报告细胞的构建:培养人胚肾细胞HEK293至融合度70%-80%,利用表达NF-κB虫荧光素FLuc的慢病毒感染HEK293细胞,感染细胞用10μg/ml杀稻...
【专利技术属性】
技术研发人员:朱建中,李双洁,何姗,周荣云,陈南华,朱美芹,
申请(专利权)人:扬州大学,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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