尿激酶催化结构域突变体的表达、纯化以及结晶制造技术

尿激酶催化结构域突变体的表达、纯化以及结晶，涉及医药、生物技术、结构生物学领域。本发明专利技术提供了一种尿激酶催化结构域突变体（Ｃ２７９Ａ／Ｎ３０２Ｑ）在巴斯德毕氏酵母中高效稳定表达、纯化以及结晶的技术方法。本发明专利技术培养的尿激酶催化结构域突变体晶体空间群为Ｒ３，单胞参数为：ａ＝ｂ＝１２０．４８＊，ｃ＝４２．４５＊，α＝β＝９０．０°，γ＝１２０．０°。该蛋白不需要任何激活就有丝氨酸蛋白酶活性，可用于尿激酶抑制剂的高通量筛选；而其所结晶出的高分辨率晶体，则为尿激酶抑制剂的设计、开发提供一个研发平台。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
尿激酶催化结构域突变体的表达方法，其特征在于：本突变体在巴斯德毕氏酵母体系中表达，并且包含如下步骤：　　　　（１）以重叠延伸定点突变的ＰＣＲ方法获得编码此肽段的基因：以尿激酶的全长基因作为模板，以③④为引物，进行第一轮ＰＣＲ，ＰＣＲ条件为：９４℃，２分钟；９４℃，５０秒，５０℃，４５秒；７２℃，２０秒，５个循环后；９４℃，５０秒，５９℃，４５秒，７２℃，２０秒，２０个循环后；７２℃，１０分钟，胶回收ＰＣＲ产物，作为大引物；　　　　以尿激酶的全长基因作为模板，以大引物、①为引物，进行第二轮ＰＣＲ，ＰＣＲ条件为：９４℃，２分钟；９４℃，４５秒，４７℃，４５秒；７２℃，４０秒，５个循环后；９４℃，４...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄明东，赵更香，袁彩，
申请(专利权)人：中国科学院福建物质结构研究所，
类型：发明
国别省市：35[中国|福建]