创伤弧菌的一管法半巢式PCR检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种可快速检测创伤弧菌的一管法半巢式ＰＣＲ检测试剂盒及检测方法。试剂盒包括：（１）ＤＮＡ提取试剂：含缓冲试剂Ａ和细胞裂解试剂Ｂ；（２）聚合酶链式反应试剂：包括反应预混试剂Ｃ和反应引物试剂Ｄ和Ｅ，试剂Ｄ中的特异引物Ｖｖｇ１为５′－ＣＡＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴＡＣＴＣＡＴＡＧＣ－３′，Ｖｖｇ２为５′－ＧＧＴＧＣＴＣＧＧＣＴＡＡＧＡＡＧＴＣＧＴＴ－３′，试剂Ｅ中的特异引物Ｖｖｇ３为５′－ＡＡＧＡＣＧＧＧＡＴＴＧＣＧＧＴＴＧＡＡＧＴ－３′；（３）电泳和显色试剂，包括试剂Ｆ、试剂Ｇ、试剂Ｈ和试剂Ｉ。检测方法包括：（１）样品处理；（２）ＤＮＡ提取；（３）聚合酶链式反应扩增；（４）电泳和显色检测。本发明专利技术的优点是检测速度快，特异性强、灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种一管法半巢式ＰＣＲ检测试剂盒，包括：（１）ＤＮＡ提取试剂：含缓冲试剂Ａ和细胞裂解试剂Ｂ；试剂Ａ含有ＮａＣｌ２００～３５０ｍｍｏｌ／Ｌ，三羟甲基氨基甲烷５０～１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐｈ＝８．０），乙二胺四乙酸二钠５０～１００ｍｍｏｌ ／Ｌ；试剂Ｂ含有浓度为５～１０％的十二烷基磺酸钠水溶液；（２）聚合酶链式反应试剂：包括反应预混试剂Ｃ和反应引物试剂Ｄ和Ｅ；试剂Ｃ包括１０×反应缓冲液５μＬ、５００～１０００μｍｏｌＬ↑［－１］的ｄＮＴＰｓ（四种脱氧核苷酸等浓度的 混合物）、１～５ｍｍｏｌＬ↑［－１］的ＭｇＣｌ↓［２］，１～２个单位的热聚合酶和适量的灭菌超纯水；试剂Ｄ包括引物Ｖｖｇ１和Ｖｖｇ２，浓度均为５～２０μｍｏｌＬ↑［－１］，Ｖｖｇ１特指（５’－ＣＡＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴ ＡＣＴＣＡＴＡＧＣ－３’）；Ｖｖｇ２特指（５’－ＧＧＴＧＣＴＣＧＧＣＴＡＡＧＡＡＧＴＣＧＴＴ－３’）；试剂Ｅ包括引物Ｖｖｇ３，其浓度为１０～３０μｍｏｌＬ↑［－１］，Ｖｖｇ３特指（５’－ＡＡＧＡＣＧＧＧＡＴＴＧＣ ＧＧＴＴＧＡＡＧＴ－３’）；（３）电泳和显色试剂，包括试剂Ｆ、试剂Ｇ、试剂Ｈ和试剂Ｉ；试剂Ｆ：为２０－５０倍电泳缓冲液，含三羟基甲基氨基甲烷－－醋酸和乙二胺四乙酸二钠，浓度分别为０．０１～０．０４ｍｏｌ／Ｌ和０．００１ｍｏｌ／Ｌ；　 　试剂Ｇ：含０．１～０．５ｇ琼脂糖；试剂Ｈ：ＮｕｃｌｅｉｃａｃｉｄＣｌｅａｒＤＮＡｓｔａｉｎ试剂Ｉ：标准分子量ＤＬ２０００。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢珍玉，周永灿，冯永勤，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：66[中国|海南]