一种反向杂交偶联延伸DNA测序方法技术

本发明专利技术公开了一种反向杂交偶联延伸ＤＮＡ测序方法，将未知ＤＮＡ模板与多条３’末端为３个或３个以上已知碱基的探针平行杂交并延伸标记的碱基，通过检测是否有标记物延伸，根据碱基互补原理确定未知ＤＮＡ模板是否有对应的四个（或以上）连续碱基的信息，拼接出待测ＤＮＡ序列信息；包括重复进行的杂交、延伸和检测步骤。本发明专利技术方法在传统杂交测序法中加入延伸一步，能够解决假阳性及成本高的问题，实现高通量，低成本，高灵敏度和快速测定短片段ＤＮＡ序列。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种反向杂交偶联延伸ＤＮＡ测序方法，其特征在于ＤＮＡ序列确定是通过３’末端为已知碱基的杂交引物平行地与待测ＤＮＡ序列经过多次杂交、延伸、检测来实现，包括如下步骤：步骤１）３’末端为三个或三个以上已知碱基的杂交引物与固定的未知ＤＮＡ模 板在杂交液中加热，然后冷却退火进行杂交；步骤２）用洗液洗净杂交液后，标记单体在聚合酶的催化下，在杂交引物的３’末端延伸一个或多个碱基；通过芯片扫描仪读取延伸碱基的信息，确定未知ＤＮＡ模板上的包含数个碱基的序列；步骤３）用变性 液将延伸碱基的杂交引物从未知ＤＮＡ模板中洗脱，再将３’末端已知碱基序列不同的杂交引物按步骤１）与未知ＤＮＡ模板杂交并进行步骤２），确定未知ＤＮＡ模板上的包含数个碱基的不同序列；用不同的杂交引物重复上述过程，直到完成ＤＮＡ序列测定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陆祖宏，李燕强，肖鹏峰，潘志强，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]