用发根农杆菌遗传转化粘毛黄芩获得产黄芩苷的毛状根的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用基因工程技术遗传转化粘毛黄芩，获得生产黄芩苷的粘毛黄芩的毛状根的方法。涉及包含发根农杆菌遗传转化粘毛黄芩的方法，遗传转化获得可生产黄芩苷的粘毛黄芩毛状根。其过程是用发根农杆菌遗传转化粘毛黄芩，获得了粘毛黄芩毛状根，经分子检测确为遗传转化的毛状根，ＨＰＬＣ检测表明遗传转化获得的粘毛黄芩毛状根能够生产黄芩苷。本方法可以为黄芩苷的生产提供一种新型可持续的新型药源。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种获得产黄芩苷的粘毛黄芩毛状根的方法，特征在于采用转基因技术，用发根农杆菌遗传转化粘毛黄芩的器官，其步骤如下：（１）粘毛黄芩无菌外植体的获得；（２）采用转基因方法转移发根农杆菌的Ｒｉ质粒的Ｔ－ＤＮＡ到粘毛黄芩细胞、组织、器官或植株中；其中转基因方法选择发根农杆菌Ｒｉ质粒介导遗传转化、基因枪法介导的遗传转化、花粉管通道介导基因转化或生殖细胞浸泡法介导基因转化；包括以下步骤：Ａ、活化发根农杆菌；Ｂ、发根农杆菌浸染粘毛黄芩外植体；Ｃ、发根农杆菌与粘毛黄芩外植体的共培养，步骤如下：Ⅰ、将侵染后的粘毛黄芩外植体接种在ＭＳ＋ＡＳ１００μｍｏｌ.Ｌ↑［－１］固体培养基上；Ⅱ、置于温度为２５℃±１．０℃恒温暗培养１～５天Ｄ、外植体的除菌培养；（３）粘毛黄芩毛状根的获得与继代培养；（４）粘毛黄芩毛状根的分子检测，方法如下：Ⅰ、提取粘毛黄芩毛状根ＤＮＡⅡ、获得含ｒｏｌＢ和ｒｏｌＣ引物的ＰＣＲ反应体系；Ⅲ、ＰＣＲ反应扩增毛状根特有基因ｒｏｌＢ和ｒｏｌＣ；Ⅳ、电泳检测目标条带；（５）粘毛黄芩毛状根中黄芩苷的含量检测。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙敏，雷桅，王淑芳，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]