一种采用单链构象多态性技术分析微生物群落结构组成的方法技术

一种采用单链构象多态性技术分析微生物群落结构组成的方法，它涉及一种分析微生物群落结构组成的方法。它解决了目前现有的生物检测和分析方法难以分析微生物群落的生物组成结构的问题。方法：一、提取微生物群落ＤＮＡ；二、ＰＣＲ扩增；三、酶切去除反意义链；四、凝胶电泳；五、纯化ＤＮＡ；六、微生物群落的组成结构分析。本发明专利技术可以对工程系统内复杂的微生物群落进行群落结构分析，具有快速、准确的优点，可以解析群落演替，同步掌握工艺系统内微生物菌群变化情况，指导工艺、提高工程系统的运行效率。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种采用单链构象多态性技术分析微生物群落结构组成的方法，其特征在于采用单链构象多态性技术分析微生物群落结构组成的方法按以下步骤进行：一、采用周冀中等人的ＤＮＡ提取方法提取微生物群落ＤＮＡ；二、ＰＣＲ扩增：ＰＣＲ扩增正向引物序列为ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ，ＰＣＲ扩增反向引物序列为ＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡ，反向引物５’端采用磷酸标记；三、酶切去除反意义链：酶切反应体系为５０μＬ由５μＬ１０×ｂｕｆｆｅｒ缓冲溶液、４０μＬＰＣＲ扩增产物和５μＬ浓度为５Ｕ／μＬ的λ核酸外切酶组成，酶切反应体系在３７℃的环境中反应３～４ｈ，然后纯化酶切产物，再溶解于２０μＬ重蒸馏水中；四、将溶解于重蒸馏水中的酶切产物与等体积的变性剂混合置于９５℃的环境中热变性处理１０ｍｉｎ，然后立即冰浴５ｍｉｎ，之后凝胶电泳上样、在４～２０℃、电压为２５０～３００Ｖ的条件下电泳１２～１８ｈ；五、将凝胶浸泡于重蒸馏水中１０ｍｉｎ，然后用灭菌的刀片将ＤＮＡ条带分别切下放入离心管中并研碎，再向每支离心管中加入５０μＬ裂解液在３７℃的环境中处理３ｈ，然后离心、分离上清液，并向上清液中加入上清液体积２倍的无水乙醇，置于－２０℃的环境中沉淀２ｈ，再在２４０００ｇ、４℃的条件下离心１５ｍｉｎ，沉淀物ＤＮＡ在３７℃的环境中干燥１５ｍｉｎ后加入１０μＬＴＥ溶液；六、对步骤五得到的沉淀物ＤＮＡ分别进行分析，即得出微生物群落的组成结构；步骤四凝胶中丙烯酰胺与甲叉丙烯酰胺占凝胶总重量的１０％～１４％、甘油占凝胶总重量的５％～１０％，其中丙烯酰胺与甲叉丙烯酰胺的质量比为４９～５５∶１；步骤四中变性剂由去离子甲酰胺和上样缓冲液组成，其中上样缓冲液由ＮａＯＨ溶液、ＥＤＴＡ、溴酚蓝、二甲苯氰ＦＦ和去离子水组成，上样缓冲液中ＮａＯＨ的浓度为１０ｍＭ／Ｌ、ＥＤＴＡ的浓度为２０ｍＭ／Ｌ、溴酚蓝的浓度为０．０２％（重量）、二甲苯氰ＦＦ的浓度为０．０２％（重量），去离子甲酰胺与上样缓冲液的体积比为１∶３；步骤五中５０μＬ的裂解液含有０．５Ｍ／Ｌ的乙酸铵、１０ｍＭ／Ｌ的乙酸镁，１ｍＭ／Ｌ、ｐＨ值为８．０的ＥＤＴＡ、０．１％（重量）的ＳＤＳ和余量的重蒸馏水。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王爱杰，于振国，任南琪，阚洪晶，刘春爽，张运晴，赵阳国，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：93[]