一种浙贝母病毒的组培鳞茎保存方法技术

本发明专利技术涉及一种浙贝母病毒的组培鳞茎保存方法，属植物病毒保存技术领域，包括如下步骤：病毒病原种类的鉴定、培养基的配制、脱毒组培鳞茎的培养、病毒ＥＬＩＳＡ检测、病毒摩擦接种、病毒的鳞茎保存。本发明专利技术的优点是：利用浙贝母脱毒组培鳞茎感染提纯病毒，再进行浙贝母组培鳞茎保存病毒，克服了传统保存的不足，可防止病毒混杂与丢失，且易提取制备高滴度病毒，为抗病毒育种和病毒检测抗血清制备中提供高纯度的病毒，降低了保存成本并提高了保存效果，并便于携带交流。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种浙贝母病毒的组培鳞茎保存方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：　　　　１）、浙贝母病毒病原种类的鉴定：　　　　２）、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：　　　　（１）基本培养基：选用ＭＳ培养基，蔗糖或白糖２０～４０ｇ／Ｌ，琼脂７～９ｇ／Ｌ，ｐＨ５．６～５．８；　　　　（２）子鳞茎诱导培养基：ＭＳ＋２，４－Ｄ０．５～１．５ｍｇ／Ｌ和ＺＴ１～３ｍｇ／Ｌ＋蔗糖或白糖３０ｇ／Ｌ；　　　　（３）子鳞茎增殖培养基：ＭＳ＋ＢＡ１～３ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ１～３ｍｇ／Ｌ＋蔗糖或白糖４０ｇ／Ｌ＋盐酸硫胺素（ＶＢ↓［１］）４ｍｇ／Ｌ；　　　　（４）壮苗培养基：ＭＳ＋ＢＡ０．５～１．５ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．５～１．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖或白糖４０ｇ／Ｌ＋盐酸硫胺素（ＶＢ↓［１］）４ｍｇ／Ｌ；　　　　（５）子鳞茎保存培养基：１／２ＭＳ＋ＢＡ０．０５～０．１ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．０５～０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖或白糖２０ｇ／Ｌ＋盐酸硫胺素（ＶＢ↓［１］）４ｍｇ／Ｌ；　　　　（６）鳞茎生长培养基：ＭＳ＋ＢＡ０．１～１ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．１～１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖或白糖４０ｇ／Ｌ＋盐酸硫胺素（ＶＢ↓［１］）４ｍｇ／Ｌ＋水解酪蛋白（ＣＨ）５００ｍｇ／Ｌ；　　　　（７）生根培养基：１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．１～１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖或白糖２０ｇ／Ｌ＋盐酸硫胺素（ＶＢ↓［１］）４ｍｇ／Ｌ；　　　　３）、浙贝母脱毒组培鳞茎的培养，按如下步骤进行：　　　　（１）外植体的选取与灭菌：取浙贝母新生长的鳞茎或嫩茎或花梗为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；　　　　（２）子鳞茎诱导培养：将步骤（１）灭菌处理后的鳞茎或嫩茎或花梗在无菌条件下，切成０．３～０．６ｃｍ的切段，接种在子鳞茎诱导培养基上，经１～２个月后，从鳞茎或嫩茎或花梗外植体上诱导形成子鳞茎；　　　　（３）子鳞茎增殖培养：将步骤（２）诱导形成的子鳞茎转接到子鳞茎增殖培养基上，培养３０～４５天增殖出子鳞茎；　　　　（４）壮苗培养：将步骤（３）增殖的子鳞茎经４℃低温处理１周，然后培养３０～４５天后长成壮苗；　　　　（５）热处理：将步骤（４）长成的壮苗经３５℃、２～４周处理后，供茎尖培养用；　　　　（６）茎尖培养：将步骤（５）热处理过的组培苗在４０倍的双筒解剖镜下，摘出０．２～０．５ｍｍ大小的带１～２个叶原基的茎尖作为脱毒培养的外植体；　　　　（７）子鳞茎诱导培养：将步骤（６）摘出的茎尖接种在...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈剑平，徐刚，汪一婷，吕永平，牟豪杰，郑红英，林林，程晔，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]